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摘要【目的】<br>　　近年来，长链非编码RNA（lncRNA）被认为是肿瘤行为的关键调节因子之一。WT1-AS是一种新发现的癌症相关lncRNA，是WT1的反义长链非编码RNA，在多种肿瘤组织中均有差异性表达。本研究旨在了解WT1-AS基因在大肠癌（CRC）组织中的表达情况及在CRC细胞中的生物学特性，通过初步探索WT1-AS与其相关的上游或下游因子之间的联系，从而了解其在CRC中的可能作用机制，为寻找CRC的早期诊断敏感的生物学指标、基因靶向治疗点及提高抗癌效果等方面开辟新的途径。<br>　　【方法】<br>　　1．收集人类正常大肠组织、CRC组织、CRC癌旁组织及大肠腺瘤组织作为研究对象。<br>　　2．用荧光定量PCR的方法检测上述各组大肠组织中WT1-AS、FUS、UPF1mRNA的表达水平；用Westernblot检测上述各组大肠组织中FUS、UPF1蛋白的表达水平。<br>　　3．分别将WT1-ASsiRNA或WT1-AS过表达质粒转染至人CRCHCT-116细胞株，用CCK8试剂盒检测WT1-AS基因对CRC细胞增殖的影响；用流式细胞仪和凋亡试剂盒检测WT1-AS基因对CRC细胞凋亡的影响；用Transwell检测WT1-AS基因对CRC细胞迁移的影响；用荧光定量PCR、Westernblot分别检测UPF1、FUS基因mRNA和蛋白的表达水平；分析UPF1、FUS基因与WT1-AS基因的表达之间的相关性。<br>　　4．对WT1-AS基因与CRC患者临床病理指标的关系进行分析。<br>　　【结果】<br>　　1.WT1-AS、FUS、UPF1mRNA在各组大肠组织中的表达情况<br>　　（1）正常对照组WT1-ASmRNA的表达水平最高，分别与CRC组、CRC癌旁组及大肠腺瘤组相比较，差异均有显著统计学意义（P＜0.01）；另外CRC组WT1-ASmRNA的表达水平显著低于CRC癌旁组，两者相对比，差异有显著统计学意义（P＜0.01），但CRC组与大肠腺瘤组相比较，差异无显著性（P＞0.05）；CRC癌旁组WT1-ASmRNA的表达水平高于大肠腺瘤组织，两者相比较，差异均有显著统计学意义（P＜0.01）。<br>　　（2）CRC组FUSmRNA的表达水平显著高于正常对照组及CRC癌旁组，分别与正常对照组、CRC癌旁组相比较，差异有显著统计学意义（P＜0.01）；大肠腺瘤组FUSmRNA的表达水平也显著高于正常对照组及CRC癌旁组，分别与正常对照组、CRC癌旁组相比较，差异有显著统计学意义（P＜0.01）；且CRC组FUSmRNA的表达水平稍高于与大肠腺瘤组，但两者比较，差异无显著性（P＞0.05）；另外FUSmRNA在CRC癌旁组中的表达水平与正常组织对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。<br>　　（3）CRC组UPF1mRNA的表达水平均高于正常对照组、CRC癌旁组、大肠腺瘤组，分别与正常对照组、CRC癌旁组、大肠腺瘤组相比较，差异有显著统计学意义（P＜0.01）；大肠腺瘤组UPF1mRNA的表达水平也显著高于正常对照组及CRC癌旁组，分别与正常对照组、CRC癌旁组相比较，差异有显著统计学意义（P＜0.01）；但正常对照组与CRC癌旁组比较，差异无显著性（P＞0.05）。<br>　　2.UPF1、FUS基因蛋白在各组大肠组织中的表达情况<br>　　(1)FUS蛋白在正常对照组及CRC癌旁组织中不表达或极少表达，CRC癌旁组与正常对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；CRC组与大肠腺瘤组FUS蛋白的表达水平明显高于正常对照组、CRC癌旁组，分别比较，差异均有显著统计学意义（P＜0.01）；且CRC组FUS蛋白的表达水平高于大肠腺瘤组，两者相比，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。<br>　　(2)UPF1蛋白在正常对照组及CRC癌旁组织中不表达或极少表达，两者比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；CRC组UPF1蛋白的表达水平较正常对照组及CRC癌旁组高，分别与CRC癌旁组及正常对照组相比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；但大肠腺瘤组显著高于CRC组、正常对照组、CRC癌旁组，分别与CRC组、正常对照组、CRC癌旁组相比较，差异均有显著统计学意义（P＜0.01）。<br>　　3.CRC组织中WT1-AS与FUS、UPF1基因mRNA表达的相关性<br>　　在CRC组织中WT1-AS与FUSmRNA的表达呈显著的负相关（r=-0.608，P＜0.01），与UPF1mRNA的表达呈显著的正相关（r=0.5839，P＜0.01）。<br>　　4.WT1-AS基因在CRC细胞中的生物学特性<br>　　转染WT1-ASSiRNA组与对照组比较，CRC细胞增值率和迁移率均显著增高，凋亡率降低，差异有统计学意义(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.05)。转染WT1-AS过表达质粒组与对照组比较，CRC细胞增值率和迁移率均降低，凋亡率增高，差异有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05，P＜0.05)。<br>　　5.WT1-AS基因对FUS、UPF1基因的调控情况<br>　　与对照组比较，WT1-ASSiRNA转染组FUS、UPF1两者的mRNA和蛋白的表达水平均上调，差异均有统计学意义(P＜0.05)。WT1-AS过表达质粒转染组FUS、UPF1两者的mRNA和蛋白的表达水平均下调，差异均有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）。<br>　　6．WT1-AS基因与CRC患者临床病理指标的关系<br>　　WT1-ASmRNA在低分化CRC组织中的表达量低于对照组，两组比较，差异有显著统计学意义（P＜0.01）；有远处转移的CRC组织中的表达量低于对照组，两组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；而WT1-ASmRNA的表达量在不同的性别、年龄、肿瘤大小、分期、是否有淋巴结转移等方面进行比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。<br>　　【结论】<br>　　1．WT1-AS基因在CRC组织中表达下调，且可能与CRC的分化程度和有无远处转移有关。<br>　　2．WT1-AS基因抑制CRC细胞增殖和细胞迁移，促进其凋亡。<br>　　3．FUS、UPF1基因在CRC组织中均高表达，可能与WT1-AS基因调控密切相关。