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摘要目的探讨以体外模型诱导M2型巨噬细胞的可行性方案。<br>　　方法不同浓度的分化剂PMA体外诱导人单核细胞株THP-1获取巨噬细胞(THP-1-Mφ)，通过吞菌实验(在计数的基础上染色后用卡介苗侵染细胞)观察THP-1-Mφ的活性。分别用细胞增殖示踪荧光探针(CFDA SE)染液标记THP-1-Mφ为绿色，Hoechst33342染液标记卡介苗(BCG)为蓝色，在活细胞工作站下观察巨噬细胞的吞噬活性。由于PMA的浓度以及诱导结束后用含10%血清RPMI1640孵育细胞使得细胞恢复到对后续炎性刺激最佳状态的时间是决定能否在INF-γ、IL-4细胞因子作用下成功诱导出活化巨噬细胞M1/M2的关键要素，故比较了诱导结束后同一孵育时间不同诱导浓度对THP-1-Mφ细胞贴壁率的影响，同时用流式细胞术检测细胞表面标志分子(巨噬细胞测CD11b和CD14，M1型巨噬细胞测CD16和CD86，M2型巨噬细胞测CD206和CD163)摸索分化剂PMA影响后续巨噬细胞极化的最佳诱导浓度和诱导结束后细胞的孵育时间。<br>　　结果(1)THP-1细胞在不同诱导剂的刺激作用下可分化为不同形态贴壁生长的细胞。(2)两染色液标记结果说明THP-1-Mφ具有吞噬功能活性。(3)细胞贴壁率计数结果表明，PMA诱导结束后用R1640孵育细胞相同时间内，较低浓度之间的PMA对细胞贴壁率的影响不大，但较高浓度之间的PMA明显影响细胞的贴壁率。(4)流式细胞术结果显示：在相同诱导体系下，相比低浓度，较高浓度PMA更有利于THP-1-Mφ向M1/M2型巨噬细胞分化，PMA浓度的增加相比M2型巨噬细胞来说更多的影响M1型巨噬细胞的极化。另外，随着诱导结束后用含10%血清RPMI1640孵育细胞时间的延长会影响THP-1-Mφ自身分泌细胞因子而促使THP-1-Mφ活化，进一步影响THP-1-Mφ细胞的形成而影响M1/M2活化巨噬细胞的诱导。<br>　　结论为了平衡诱导的有效性和诱导结束后孵育细胞时间对后续刺激的影响同时限制PMA本身的刺激作用，以终浓度为50ng/mlPMA诱导THP-1细胞48h后，用含10%血清RPMI1640孵育细胞24h，然后给予终浓度为20ng/ml的IFN-γ、IL-4孵育24h以致分化为M1/M2型巨噬细胞，<br>　　为后期布鲁菌感染诱导M2型巨噬细胞并实现寄生相关机制的研究提供合适的细胞模型。<br>　　目的研究布病患者血浆microRNA用于新型临床诊断标记的可行性。<br>　　方法系统分析布病患者(经抗生素治疗组和未治疗组)与健康志愿者的临床资料，包括性别、年龄以及是否来自同一地区和是否为汉族。为了研究microRNAs的表达情况和布病患者有无明显临床症状的关系，同时分析了符合纳入标准的个体是否伴有发热、乏力、关节痛和出汗等。然后通过采集全血样本，利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)，测定验证样本血浆中microRNAs的表达水平。比较布病患者和健康志愿者以及经抗生素治疗组和未治疗组患者之间的microRNAs差异表达，进一步分析抗生素的治疗是否影响布病患者血浆中的microRNAs。另外，根据标准试管凝集试验(SAT)的检测，将抗体滴度分为1:50，1:100和1:200三个标准，检测microRNAs的表达与抗体滴度的关系。最后，计算目标microRNAsROC曲线下的面积，通过ACU值反映其敏感性与特异性。<br>　　结果(1)对基本信息的整理发现，布病患者多伴有不同程度的发热、乏力和关节痛等临床症状。(2)前期实验研究发现对于布病患者miR-122、miR-145a、miR-155、miR-301a和miR-146a5种microRNAs的表达受到抑制。(3)本实验通过验证样本对这5种microRNAs做了再次评估，qRT-PCR的结果分析表明，布病患者miR-122、miR-146a和miR-155的表达量均低于健康志愿者(P＜0.05)，且在治疗组和未治疗组的布病患者之间比较，差异不具有统计学意义(P＞0.05)；同时与布病患者是否伴有明显临床症状无相关性；(4)进一步分析这5种microRNAs的表达与三个不同水准的抗体滴度关系表明，miR-146a和miR-122与抗体水平之间存在显著性关系(P＜0.001)，且miR-122与其他4种miRNAs的表达水平之间存在显著性差异；(5)最后，ACU值的计算分析得出miR-122和miR-146a组合诊断的AUC值为0.935，高于两者任何一个单独检测。<br>　　结论miR-122和miR-146a组合在布病诊断中具有潜在应用价值。