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摘要目的：生物活性肽作为当前医学领域新兴的一种抗肿瘤制剂，对人体多种生理功能具有调节作用，在调节荷瘤机体免疫功能研究领域具有一定的潜在价值。本文旨在探讨生物活性肽(Bioactive peptides , BAP)对荷胃癌裸鼠免疫功能的影响，并对其机制进行了初步的研究，为生物活性肽的开发与应用提供理论及实验依据。<br>　　方法：BAP对裸鼠免疫功能影响的测定：选取体重为(12±2)g的SPF级裸鼠60只(♀♂各半)适应性饲养4天后，随机分为5组：空白对照组(CON)、模型组(MG)、低剂量活性肽组(LBAP：0.047mg/10g)、中剂量活性肽组(MBAP：0.094mg/10g)、高剂量活性肽组(HBAP：0.188mg/10g)。体外培养的BGC-823人胃癌细胞(1x107个/ml)在MG组、LBAP组、MBAP组和HBAP组裸鼠背部种植肿瘤，种植后第4天，荷瘤裸鼠背部可触及米粒大小瘤体,病理学分析确认建模成功。第5天起，所有裸鼠按等体积药物连续腹腔注射给药(1次/日)，给药剂量随体重增加按计算所得逐渐增加。连续给药2周，末次给药24h后荷瘤裸鼠眼球静脉取血并脱颈处死。(1)用药期间观察裸鼠一般状态：包括摄食、饮水、活动度、体重、瘤体长短径及肿瘤破溃情况等；(2)2周后断颈处死小鼠，摘取脾脏组织、瘤体组织称重进行脾脏系数和抑瘤率的相关测定；(3)采用流式细胞分析技术测定各组裸鼠静脉血中NK细胞百分数和B淋巴细胞百分数；(4)采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin and eosin stain, H&E stain)，观察各组裸鼠脾脏组织和瘤组织形态学变化。<br>　　BAP对裸鼠免疫功能影响机制的研究：采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法和免疫组化法检测各组裸鼠脾脏中目的靶基因NF-κB及下游基因TNF-α在mRNA水平及蛋白功能水平的表达变化。<br>　　结果：1.荷瘤裸鼠生活质量：各组荷瘤裸鼠活动度相比较未见明显变化。与CON组相比，MG组荷瘤裸鼠摄食量无明显差异，无统计学意义(P≥0.05)。与MG组相比，LBAP组、MBAP组和HBAP组荷瘤裸鼠摄食量无明显差异，无统计学意义(P≥0.05)。与CON组相比，MG组荷瘤裸鼠饮水量无明显差异，无统计学意义(P≥0.05)。与MG组相比，LBAP组、MBAP组和HBAP组荷瘤裸鼠饮水量明显增多，但无统计学意义(P≥0.05)。<br>　　2.瘤体：与MG组相比，LBAP组和HBAP组荷瘤裸鼠瘤体体积和抑瘤率无明显差异(P≥0.05)，MBAP组荷瘤裸鼠瘤体体积减小，抑瘤率有显著性差异，有统计学意义(P＜0.05)，提示一定剂量的BAP对胃癌细胞具有较好的抑制增殖作用。<br>　　3.脾脏系数和免疫细胞百分比：与CON组相比，MG组荷瘤裸鼠脾脏系数增高，差异有统计学意义(P＜0.05)。与MG组相比，LBAP组和HBAP组脾脏系数无明显差异(P≥0.05)，MBAP组脾脏系数显著性增高，差异有统计学意义(P＜0.05)。与CON组相比，MG组NK细胞百分比显著性增加(P＜0.05)；与MG组相比，LBAP组、MBAP组和HBAP组的NK细胞百分比显著性增加(P＜0.05)。与CON组相比，MG组B淋巴细胞百分比显著性增加(P＜0.05)；与MG组相比，MBAP组和HBAP组的B淋巴细胞百分比组显著性增加(P＜0.05),表明MBAP可以在一定程度上提高荷瘤裸鼠的免疫功能。<br>　　4.HE染色：脾脏组织大体结构未见明显差异，表明短期连续使用BAP对荷瘤裸鼠脾脏未造成形态学改变。瘤体组织HE染色中各给药组肿瘤组织炎性浸润面积随给药剂量增加逐渐增大，在MBAP组炎性浸润面积显著。在肿瘤生长过程中炎症与免疫具有复杂的相关性，有研究报道表明在肿瘤早期阶段，肿瘤生长诱发炎症，炎症帮助免疫应答抑制肿瘤生长[1]。本次实验荷瘤裸鼠给药时间为2周，在脾脏组织中未见形态学改变，由此推断肿瘤尚在早期阶段，提示一定剂量的BAP可以增强荷胃癌裸鼠的炎性反应间接提高免疫应答水平。<br>　　5.Real-timePCR分析基因表达：与CON组相比，MG组荷瘤裸鼠的NF-κB和TNF-α的相对表达量显著性升高，差异有统计学意义(P＜0.05);与MG组相比，LBAP组和MBAP组的NF-κB的相对表达量无明显差异(P≥0.05)，HBAP组的NF-κB相对表达量显著性下降，差异有统计学意义(P＜0.05)；与MG组相比，LBAP组、MBAP组和HBAP组的TNF-α相对表达量显著性下降，差异有统计学意义(P＜0.05),提示一定剂量的BAP可以激活荷瘤裸鼠的B细胞受体信号通路抑制NF-κB和TNF-α，达到增强荷瘤裸鼠免疫功能，从而抑制肿瘤生长。<br>　　6.免疫组化分析蛋白表达：与CON组相比，MG组的NF-κB和TNF-α蛋白表达均升高，差异有统计学意义(P＜0.05);与MG组相比，LBAP组和MBAP组的NF-κB蛋白表达无明显差异(P≥0.05)，HBAP组的NF-κB蛋白表达下降有显著性差异，差异有统计学意义(P＜0.05)；与MG组相比，LBAP组的TNF-α蛋白表达无明显差异(P≥0.05)，MBAP组和HBAP组的TNF-α蛋白表达下降有显著性差异，差异有统计学意义(P＜0.05)。有研究报道表明NF-κB可以介导免疫应答的生理功能同时也具有促进肿瘤生长的作用。肿瘤细胞对机体的刺激可以诱导NF-κB活化增强机体免疫能力，但当刺激持续存在，使得NF-κB活性增加过快会引起TNF-α等致炎因子大量合成与释放，通过正反馈再次刺激NF-κB活性快速增加，诱发更大量的致炎因子生成形成“瀑布效应”，导致以自身破坏为特征的SIRS，以致吞噬细胞功能减弱抑制机体免疫功能[2]。这说明一定剂量的BAP可以激活荷瘤裸鼠的B细胞受体信号通路降低脾脏里的NF-κB和TNF-α表达，将NF-κB活化控制在一定范围内既达到增强荷瘤裸鼠免疫功能作用又能抑制肿瘤的生长。<br>　　结论：<br>　　(1)连续使用生物活性肽具有增强荷瘤裸鼠体液免疫功能的作用。<br>　　(2)连续使用生物活性肽对荷瘤裸鼠肿瘤生长有一定的抑制作用。<br>　　(3)生物活性肽对荷瘤裸鼠免疫功能的影响可能通过调控NFκB-TNF-α信号通路发挥增强免疫功能作用。