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miR-422a通过靶向SMOC1对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

摘要目的:探究miR-422a在U251细胞氧糖剥夺再灌注后对SMOC1及TGF信号通路的影响。<br>  方法:随机将人神经胶质细胞瘤株U251分为5组,分别设为正常对照组,以及氧糖剥夺1小时后再灌注不同时间的4组。各组U251细胞用MTT比色法、流式双染法检测细胞凋亡情况,用Real-timePCR检测miR-422a与SMOC1的mRNA表达,WB检测SMOC1的蛋白情况;用双荧光素酶报告基因共转染检测miR-422a对SMOC1-3’UTR的直接调控作用;分为正常对照组,试剂对照组及miR-422a过表达组3组,在氧糖剥夺1小时后再灌注24h时,用MTT比色法测细胞活性,流式双染法检测各组的凋亡率,WB检测SMOC1、TGF-β1、ALK1/5蛋白的表达。<br>  结果:1.OGD/R细胞凋亡的变化:细胞活性呈先下降再上升的表达变化,OGD/R24h组的细胞活性明显下降,达到谷值,差异具有显著性(P<0.01);细胞凋亡率则反之,表现为先上升再降低的变化趋势,在OGD/R24h达到峰值(P<0.01);<br>  2.miR-422amRNA的表达变化:OGD/R后miR-422amRNA的表达先下调再上调,OGD/R24hmiR-422amRNA明显降低,达到谷值(P<0.01);<br>  3.SMOC1的表达变化:SMOC1mRNA在OGD/R后呈现为先下调再上调的变化趋势,在OGD/R24h达到谷值(P<0.01);SMOC1蛋白表达变化同mRNA基本一致;<br>  4.上调miR-422a后SMOC1蛋白显著下降,有显著性差异(P<0.01)。双荧光素酶报告基因共转染验证试验结果显示miR-422a显著抑制SMOC1(荧光比值为56.71%)。<br>  5.miR-422a过表达组与试剂对照组、正常对照组比,氧糖剥夺再灌注24小时的miR-422a与SMOC1表达、细胞活性以及TGF-β1、ALK1明显升高(P<0.01),ALK5稍升高(P>0.05),而细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。<br>  结论:miR-422a可能在氧糖剥夺再灌注过程中发挥神经保护作用,其可能与靶向SMOC1激活TGF-β1/ALK1信号通路有关。

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