检索历史 清除

摘要随着人口老龄化以及诱发癌症因素的增加，肿瘤已经成为造成人口死亡的主要原因之一。将抑癌基因导入肿瘤细胞中的基因疗法虽然早有报道，但是由于人体内的复杂环境以及递送药物效率低，毒性大等多种原因未能实现临床化。在这项研究中，我们设计了富含组氨酸的两亲性阳离子多肽LAH4-L1与抑癌基因REIC/Dkk3形成的非共价复合物，该复合物可在不需要任何商用试剂的情况下自行进入细胞，表达DKK3蛋白，执行抑制肿瘤的功能；同时该复合物具有毒性小，结构稳定，易于操作等特点，在临床治疗方面具有重要意义。<br>　　肺癌、肝癌和三阴乳腺癌在世界范围内的发生率居高不下，本课题选取这三种肿瘤作为研究对象。阳离子两亲性多肽LAH4-L1是一种细胞穿透肽，可以携带抑癌基因进入细胞。本研究构建了LAH4-L1-REIC复合物，测评了该复合物的理化特征、毒性、稳定性以及对于肿瘤细胞的抑制作用。<br>　　在本课题中，首先确定多肽LAH4-L1递送DNA的最佳比例，以阳性细胞率和荧光强度作为检测转染效率的指标，流式细胞术检测得到多肽与DNA的质量比为6时递送效率最高，确定转染复合物LAH4-L1-REIC的配比。接下来以Zeta电位及粒径为指标测评了复合物的结构稳定性，最佳比例复合物Zeta电位为+11.13mV，粒径为239.93d.nm，表明该复合物结构稳定，毒性较低。接下来通过PCR，qPCR检测转染复合物后细胞内REIC/Dkk3基因表达量，在HepG2，SPC-A-1和MDA-MB-468细胞系中进行检测，相较于未处理组，转染LAH4-L1-REIC复合物后肿瘤细胞内REIC/Dkk3基因大量表达。随后通过流式细胞术检测转染LAH4-L1-REIC复合物后对细胞凋亡产生的影响，确定转染复合物处理肿瘤细胞后促进了细胞凋亡。最后利用Western Blot检测DKK3蛋白，以及Wnt/beta-catenin通路相关蛋白和EMT标志性蛋白的表达。免疫印迹实验结果表明转染复合物处理肿瘤细胞后，DKK3蛋白大量表达，Wnt/beta-catenin通路相关蛋白和EMT标志性蛋白表达减少。综合以上结果可以得出LAH4-L1-REIC复合物具有低毒高效的特点，且对于细胞的增殖迁移具有抑制作用。