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摘要目的：<br>　　通过复制发热动物模型、体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7、利用肠道菌群变化和血清代谢组学等研究方法，从体内、体外及蛋白水平研究石膏及其配伍对发热动物模型的解热机制进行系统的分析和评价，深入探索石膏及其配伍解热机制的具体途径及作用靶点，初步阐释石膏清热泻火，除烦止渴的传统功效，为石膏的合理应用提供依据。<br>　　方法：<br>　　1.石膏不同炮制品中金属元素分析，通过ICP-MS检测技术，对湖北应城产的生石膏、煅石膏中金属元素进行定性定量分析，分析生石膏和煅石膏所含金属元素的种类和含量差异；<br>　　2.石膏及其配伍解热作用的药效评价：<br>　　2.1分别采用脂多糖腹腔注射和酵母菌混悬液背部皮下注射建立两种发热大鼠模型，观察生石膏和煅石膏对发热模型大鼠8小时内各时间点体温的影响；<br>　　2.2.通过背部皮下注射酵母菌混悬液建立发热大鼠模型，采用实验动物体组成成分测定分析仪检测动物体组成成分的比例变化；采用血气分析仪检测动物血液中血气的变化，从生理功能角度考察石膏及其配伍对发热大鼠体液组成及血气成分变化的影响；<br>　　2.3采用酶联免疫法检测模型动物血清中白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子（TNF-α）含量；血清和脑脊液中前列腺素E2（PGE2）、精氨酸加压素（AVP）、促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、环磷酸腺苷（cAMP）和钙离子（Ca2+）含量，考察石膏及其配伍对发热模型大鼠体内致热因子的影响；<br>　　2.4通过小鼠热板实验、二甲苯致耳肿胀实验、醋酸扭体实验，观察石膏及其配伍的抗炎镇痛作用；<br>　　3.石膏及其配伍解热作用的机制研究：<br>　　3.1选取21个样品，分为7组进行代谢研究；针对石膏及其配伍在解热作用机制方面寻找其发热相关的特征性生物标记物，并对其可能的解热通路进行筛选；<br>　　3.2采用蛋白免疫印迹分析方法分析石膏及其配伍对发热模型大鼠下丘脑和肝脏组织中NF-κB通路中相关蛋白的表达水平；进一步确定石膏及其配伍解热的具体途径及其作用靶点；<br>　　3.3通过体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7，采用脂多糖诱导细胞炎性模型，考察石膏及其配伍对炎性细胞活力、一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（iNOS）水平的影响；<br>　　3.4采用蛋白免疫印迹分析方法分析石膏及其配伍对脂多糖诱导的细胞炎性模型中NF-κB信号通路相关蛋白的表达水平，从细胞水平上阐释石膏及其配伍解热的具体机制及途径；<br>　　3.5应用16SrRNA菌群生物多样性分析技术，进行石膏及其配伍对发热模型大鼠肠道菌群生物多样性的分析，考察石膏及其配伍对发热模型大鼠肠道菌群的干预作用。<br>　　结果：<br>　　1.ICP-MS检测结果显示，生石膏与煅石膏的微量元素有一定的差异，炮制后镁、铁、钾、钠和铝元素含量有所降低，锌和钙元素增加。<br>　　2.1与模型组相比，生石膏能够降低两种发热模型动物的体温，使其恢复基础体温达到解热的作用，而煅石膏和硫酸钙不能降低发热动物的体温，无解热作用；<br>　　2.2与模型组相比，石膏及其配伍能够使模型动物体内总含水量比率升高（P＜0.05），细胞外液比例升高（P＜0.05），脂肪含量百分比没有明显变化；与模型组相比，石膏及其配伍能够使模型动物血气中pCO2降低（P＜0.05），血氧中氧饱和度（sO2%）和碳氧血红蛋白分数（FO2Hb%）升高（P＜0.05），电解质中Ca2+降低（P＜0.05）；<br>　　2.3与模型组相比，石膏及其配伍能够使血清中IL-6、IL-1β和TNF-α含量显著降低（P＜0.05）；与模型组相比，脑脊液中PGE2、CRH和cAMP含量显著降低（P＜0.05），AVP和Ca2+含量显著升高（P＜0.05），血清中PGE2、CRH、cAMP、Ca2+含量显著降低（P＜0.05），AVP含量显著升高（P＜0.05）；<br>　　2.4与空白组相比，石膏及其配伍能够延长小鼠舔足时间（P＜0.05），减少醋酸引起小鼠的扭体次数（P＜0.05），降低耳肿胀度（P＜0.05）<br>　　3.1基于广泛靶向代谢组技术的代谢分析，共检测到了482个代谢物。血清代谢分析显示与发热相关的生物标志物17种，与石膏及其配解热作用相关且回调的生物标志物21。回调的代谢物中L-O-磷酸丝氨酸、L-精氨酸、D-葡醛内酯、甘氨胆酸、前列腺素E2、L-谷氨酸、18-羟基皮质(甾)酮7种差异代谢物与发热高度相关，这些差异代谢物参与的主要代谢通路和途径均与炎症介质对TRP通道的调节、NF-κB信号通路、HIF-1信号通路，mTOR信号通路有关；<br>　　3.2与模型组相比，石膏及其配伍能够显著下调下丘脑组织中NF-κB和IκKβ蛋白的表达（P＜0.05），IκBα蛋白表达显著升高（P＜0.05）；与模型组相比，石膏及其配伍能够显著下调肝脏组织NF-κB、IκBα和IκKβ蛋白的表达（P＜0.05）；<br>　　3.3石膏及其配伍对小鼠巨噬细胞RAW264.7活力没有影响，与模型组相比，石膏及其配伍能够明显降低细胞上清液中NO含量（P＜0.05）；与模型组相比，石膏及其配伍能够明显降低脂多糖诱导的iNOS含量升高（P＜0.05）；<br>　　3.4与模型组相比，石膏及其配伍能够显著下调炎性细胞中NF-κB和IκKβ蛋白的表达（P＜0.05），IκBα蛋白表达显著升高（P＜0.05）；<br>　　3.5发热模型大鼠菌群组成结构、丰度与正常组大鼠相比存在显著差异，酵母菌诱导大鼠发热后肠道菌群发生了结构性变化其中Alpha-proteobacteria、Selenomonadales、Rhodospirillales、Akkermansiaceae、Burkholderiaceae、Acidaminococcaceae、Lachnospirace-ae_NK4A136_group、Prevotella_9、Phascolarctobacterium变化较为显著。通过给予受试药物后各个物种都有不同程度的回调，特别是石膏组、药对组和白虎汤组几乎是以上物种均有回调作用。<br>　　结论：<br>　　石膏及其配伍能够显著的降低发热模型大鼠体温，可能与干预NF-κB信号通路调节，维持体液组成成分的平衡，调节肠道菌群生物多样性，改善体内氨基酸代谢、脂代谢紊乱有关。