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摘要黑皮鸡枞菌（Oudemansiella radicata）多糖具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等活性，但其对四氯化碳（Carbon tetrachloride，CCl4）诱导的小鼠慢性肝损伤的保护效应及其作用机制研究较少。本课题利用单因素试验和响应面分析（Response surface methodology， RSM）优化黑皮鸡枞菌菌丝体多糖（Mycelia polysaccharides of O. radicata，MPO）的提取条件，热水浸提法和醇沉法获得MPO，分离纯化得到MPO-W，对其进行结构和体外抗氧化能力测定，并利用 CCl4诱导的慢性肝损伤小鼠模型，初步探索 MPO-W的肝损伤修复机制，为寻找和发现天然保肝护肝药物提供理论参考。主要研究结果如下：<br>　　（1）MPO的提取条件优化。最优提取条件为提取温度90℃、提取时间3.37h、加水体积27.93mL和pH6.96，理论得率为1.64%。考虑操作方便，提取条件设定为提取温度90℃、提取时间3.5h、加水体积30mL和pH7，MPO的理论得率为1.62%，实际得率为1.67±0.14%。<br>　　（2）MPO的分离纯化。脱色素和去蛋白后的MPO通过DEAE-52纤维素离子交换层析和Sephadex G-100葡聚糖凝胶层析进一步分离纯化，获得主要组分MPO-W，且其纯度达到91.73±2.63%。<br>　　（3）MPO-W的物理化学性质及结构测定。物理化学性质显示，MPO-W是一种浅土黄色粉末状物质，不溶于大多数有机溶剂，热稳定性好，且膨胀度、保水能力和持油能力分别是134.81±3.93%、4.55±0.29%和2.38±0.05%。气质联用（ Gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）和高效凝胶渗透色谱（High-performance gel-permeation chromatography，HPGPC）分析表明，MPO-W的分子量为1.30×105Da，主要由岩藻糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖构成，摩尔比为8.67∶37.89∶35.98∶16.60。根据傅里叶变换红外光谱（Fourier transform-infrared spectroscopy，FT-IR）、甲基化分析、核磁共振（Nuclear magnetic resonance，NMR）结果表明，MPO-W主要由Manp-(1→、→3)-Fucp-(1→、→2)-Manp-(1→、→4)-Glcp-(1→、→6)-Galp-(1→和→2,6)-Manp-(1→六种糖残基组成，且具有α和β构型的吡喃糖。扫描电镜及刚果红试验结果显示，MPO-W分子间作用力大，结构紧密，且不具有三维螺旋空间构象。<br>　　（4）MPO-W的体外抗氧化能力测定。MPO-W对羟基、超氧阴离子和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基具有一定的清除能力，且还原力较强。<br>　　（5）MPO-W对CCl4诱导小鼠慢性肝损伤的修复作用。①对于CCl4代谢酶，MPO-W能较好地改善肝组织中细胞色素 P4502E（Cytochrome P4502E1，CYP2E1）的活性和mRNA表达。②对于肝损伤程度，慢性肝损伤小鼠血清中肝损伤标志酶的活性明显被MPO-W抑制，且小鼠肝组织病理学切片也显示MPO-W的干预能够减轻肝损伤程度。③对于肝脂和血脂代谢紊乱，MPO-W可有效地调控慢性肝损伤小鼠肝组织中腺苷酸活化蛋白激酶-α（Adenosine monophosphate activated protein kinase-α，AMPKα）和甾醇调节元件结合蛋白-1c（Sterol regulatory element binding proteins-1c，SREBP-1c）减少TC和TG堆积，也改善了血脂代谢紊乱。④对于体内抗氧化能力，MPO-W明显提升慢性肝损伤小鼠肝组织中总抗氧化能力（Total antioxidant capability，T-AOC）及抗氧化酶活性，并降低丙二醛（Malondialdehyde，MDA）和脂质过氧化物（Lipid peroxide，LPO）含量；抗氧化相关蛋白和荧光探针DHE标记的ROS分析表明，MPO-W显著上调血红素加氧酶-1（Heme oxygenase-1，HO-1）和红系衍生的核因子2相关因子2（Nuclear factor erythroid2-related factor2，Nrf2）的蛋白和mRNA表达，降低细胞中ROS水平，进一步证明MPO-W具有较好的抗氧化活性。⑤对于抗纤维化能力，MPO-W明显下调转化生长因子β1（Transforming growth factorβ1，TGFβ1）的蛋白和mRNA表达，从而抑制肝星状细胞活化；马森（Masson）和天狼猩红（Sirius red）染色及羟脯氨酸（Hydroxyproline， Hyp）分析结果也支持 MPO-W的抗纤维化作用。⑥对于炎症反应，MPO-W有效地遏制 IκB激酶（IκB kinase，IKK）和核转录因子p65（Nuclear factor-κB p65，NF-κB p65）磷酸化及核因子κB抑制蛋白-α（Inhibitor of NF-κB-α，IκBα）降解，阻止NF-κB激活，减少炎症因子分泌，从而达到抗炎症目的。⑦对于细胞凋亡，MPO-W显著上调抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2），下调促凋亡蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Cysteinyl aspartate specific proteinase-3，Caspase-3），且Tunel法荧光标记的凋亡细胞数也说明MPO-W具有抑制细胞凋亡作用。⑧对于细胞自噬，MPO-W明显降低自噬相关蛋白-5（Autophagy-related protein-5，ATG5）、ATG7的蛋白表达及微管相关蛋白-Ⅱ（Microtubule associated protein1A/1B-light chain3-Ⅱ，LC3-Ⅱ/LC3-I）的比值，表明MPO-W具有缓解细胞自噬的能力。体内试验结果说明，MPO-W能够通过调控抗氧化、纤维化、炎症、细胞凋亡、细胞自噬中相关分子机制，修复 CCl4诱导的慢性肝损伤。