检索历史 清除

摘要背景与目的：食管癌是全球常见的恶性肿瘤之一，有较高的发病率和死亡率。近年来虽然对食管癌的治疗水平有了一定的提高，但食管癌患者的预后仍然很差，五年生存率较低。研究显示食管癌的发病机理是多基因、多步骤、多信号传导通路异常参与的共同结果，因此深入探索食管癌发生、发展的分子机制，并在此基础上寻找新的治疗标志物成为当前的研究热点。既往的研究报道了食管癌发生、发展的分子机制与原癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。随着测序技术的发展，越来越多的人关注非编码RNA的研究。<br>　　长链非编码RNA（Long non-coding RNA,lncRNA）是一类转录本大于200个核苷酸的非编码RNA（non-coding RNA，ncRNA）分子，缺少有效的开放阅读框，几乎没有蛋白编码能力，但在人类基因组中有着重要调控作用的RNA分子。研究证实lncRNA可通过多种调控方式调节基因的表达，如表观遗传修饰，转录干扰和转录激活等方式，在多种生物学过程中发挥重要的调节作用，导致肿瘤的进展和转移。研究发现，lncRNA的异常表达与多种肿瘤的发生发展密切相关，可以作为肿瘤的促进或抑制因子。因此，寻找肿瘤特异的lncRNA分子，揭示它在肿瘤发展中的潜在作用机制，发现其潜在的诊断和治疗靶点，具有十分重要的临床意义和价值。<br>　　LncRNA MNX1-AS1(Motor neuron and pancreas homeobox1-antisense RNA1)是长度为992bp的长链非编码RNA，位于7号染色体上。最近的研究证实，MNX1-AS1在结肠癌组织中显著上调，通过调节miR-218-5p/SEC61A1轴促进结肠癌的进展。此外，MNX1-AS1在乳腺癌中表达上调，通过激活AKT/mTOR通路来诱导上皮-间充质的转变。这些研究表明MNX1-AS1可以在肿瘤进展中发挥癌基因的作用，然而MNX1-AS1在食管癌中的作用与机制尚不清楚，需要进一步的研究阐明。<br>　　方法：1、采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测45对ESCC患者癌组织及其配对的癌旁组织中MNX1-AS1的表达水平，并分析MNX1-AS1与临床各项病理因素之间的关系。<br>　　2、利用siRNA靶向敲除ESCC细胞系KYSE30和KYSE150中MNX1-AS1的表达，通过WST-1增殖实验，细胞周期实验、细胞凋亡实验和Transwell迁移、侵袭实验，探讨MNX1-AS1的敲低对食管鳞癌细胞生物学功能的影响。<br>　　3、用生物信息学软件预测MNX1-AS1下游的靶基因miR-34a，qRT-PCR检测其在ESCC组织、siRNA转染后ESCC细胞系中的mRNA表达水平，通过迁移实验分析miR-34a与MNX1-AS1对食管鳞癌细胞生物学功能的影响。<br>　　4、分析miR-34a发挥作用可能的下游靶基因是SIRT1，qRT-PCR检测其在靶向敲减miR-34a、MNX1-AS1后在ESCC细胞系中的mRNA表达水平，探讨MNX1-AS1在食管鳞癌中发挥作用的分子机制。<br>　　结果：1、MNX1-AS1在ESCC癌组织的表达水平高于与其匹配的癌旁组织，此外，MNX1-AS1的表达水平与ESCC患者的淋巴结转移有关（P＜0.05）。<br>　　2、靶向敲低MNX1-AS1后，ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力均下降（P＜0.05），MNX1-AS1可以调节细胞周期和细胞凋亡，敲低MNX1-AS1后，G1期的细胞数目增多，而S期的细胞数目减少，此外，细胞的凋亡数目增多（P＜0.05）。<br>　　3、miR-34a在ESCC组织中的表达下调（P＜0.05），且miR-34a的表达与MNX1-AS1的表达呈负相关（R2=0.6419），靶向敲低MNX1-AS1后，miR-34a的表达水平显著升高（P＜0.05）。迁移实验表明抑制miR-34a表达可以部分逆转MNX1-AS1对ESCC细胞的迁移能力（P＜0.05）。<br>　　4、SIRT1在ESCC组织的表达上调（P＜0.05），靶向敲低MNX1-AS1后，SIRT1的表达水平降低（P＜0.05），敲低miR-34a后，SIRT1的表达水平显著升高（P＜0.05）。<br>　　结论：1、MNX1-AS1在ESCC癌组织的表达水平升高，且与ESCC患者的淋巴结转移有关。<br>　　2、靶向敲低MNX1-AS1后，ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力均下降且MNX1-AS1可以调节细胞周期和细胞凋亡，MNX1-AS1促进ESCC进展可能是通过调控miR-34a/SIRT1轴这一途径来实现的。