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CircAkap17b作为miR-7家族的分子海绵调控大鼠腺垂体FSH分泌机制研究

摘要腺垂体作为哺乳动物最重要的内分泌器官,在动物生长发育,代谢,繁殖,泌乳与哺乳、应激反应中起着关键调控作用。腺垂体合成分泌的FSH和LH不仅可以诱导和维持正常的卵泡发生和精子产生,调节生殖过程,而且FSH可以直接调节骨量,防止骨质流失,还可以减少体内脂肪的积累并保持能量稳态。因此,进一步明确FSH合成与分泌的分子调节机制至关重要。环状RNA(circRNA)是最近发现的一种特殊的新型内源性非编码RNA,越来越多的研究表明circRNA在各种生理活动和癌症中发挥关键作用。然而,circRNA是否参与FSH调控,影响哺乳动物的生殖的研究仍然是未知的。为了探索circRNA对腺垂体FSH分泌的影响,在前期通过不同发育时期大鼠腺垂体circRNA的差异表达谱分析,筛选到一个表达丰富且差异表达的circRNA,根据它的来源命名为circAkap17b,进行进一步的研究。<br>  本研究通过双荧光素酶报告系统和转染实验,分析了miR-7家族对FSHβ转录后调控的作用;进而应用生物信息学解析差异表达的circAkap17b与miR-7家族的相互作用关系;构建过表达circAkap17b质粒和设计siRNA分析circAkap17b对腺垂体FSH分泌的潜在影响;双荧光素酶报告系统和RIP实验等验证circAkap17b与miR-7家族的相互作用。结果表明:<br>  1.miR-7家族可以靶向FSHβ,抑制大鼠腺垂体FSH的分泌。同大鼠的其他组织相比,miR-7在大鼠垂体中有很高的表达水平,存在显著差异;同时miR-7在成熟大鼠垂体中低表达。双荧光素酶报告系统和miR-7的转染实验证明miR-7抑制大鼠腺垂体FSH的分泌。<br>  2.CircAkap17b可以作为miR-7的分子海绵调控大鼠腺垂体FSH的分泌。通过基因组比对表明circAkap17b来源于大鼠的X号染色体上Akap17b基因的反义链,同时使用荧光原位杂交技术(FISH),电泳和RT-qPCR来鉴定circAkap17b。之后通过沉默和过表达circAkap17b后,FSH基因和激素受到明显的影响,这表明circAkap17b对FSH分泌具有潜在调控能力。RIP实验和双荧光素酶报告系统证明circAkap17b与miR-7具有靶向关系,拯救实验也表明circAkap17b可以通过miR-7去调控大鼠腺垂体FSH的分泌。<br>  综上所述,本研究分析了差异表达的circAkap17b通过circAkap17b—miR-7—FSH信号途径调控大鼠腺垂体FSH的分泌,解析了大鼠垂体中的circRNA参与调控生殖分泌的方式,为进一步解析调控垂体激素分泌的生物学机制提供理论支持。

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