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摘要骨骼肌占人体体重的40%，在运动和能量代谢中发挥重要作用，是人体最重要的组织之一。骨骼肌由大量的肌纤维构成，每个多核肌纤维则是通过单核成肌细胞分化及融合而成。骨骼肌损伤后修复是通过单个肌卫星细胞（一种肌肉干细胞）激活、分化并相互融合形成新生纤维来完成的。骨骼肌的发育与损伤后修复对于生命活动的维持具有重要意义，成肌细胞融合是此过程中的重要环节。研究成肌细胞融合的机制对骨骼肌的正常发育以及损伤后修复至关重要。本研究主要通过建立动物损伤模型以及体外诱导成肌细胞融合两种方法来探究成肌细胞融合的机制。<br>　　研究发现小GTP酶ARF6可以通过PLD1/PIP5K-PIP2促进成肌细胞融合。ARF6有GTP结合的激活形式和GDP结合的非激活形式两种状态，我们利用ARF6-Q67L/T44N质粒突变来模拟ARF6的两种状态，来研究ARF6在各种细胞活动中的作用机制。研究表明RASSF4可以通过ARF6-PIP5K-PIP2来调节SOCE和ER-PM的连接，他们发现RASSF4更易与ARF6-GDP形式结合。研究表明，RASSF4可以促进人骨骼肌原代细胞的肌源性分化，但其机制需要进一步研究。因此，本研究将探究RASSF4在成肌细胞分化与融合过程中的作用，以及在成肌细胞中RASSF4与ARF6的关系。<br>　　目的：<br>　　1.研究RASSF4在成肌细胞分化与融合过程中的作用。<br>　　2.研究在成肌细胞中，RASSF4与ARF6的关系。<br>　　方法:<br>　　1.利用RT-PCR以及qPCR检测RASSF4在骨骼肌形成过程、骨骼肌损伤后修复过程以及体外诱导成肌细胞分化融合过程中的表达情况。<br>　　2.在小鼠成肌细胞系C2C12中过表达或敲低RASSF4，通过免疫荧光和Western blot检测myogenin、myosin的表达水平，以及统计融合指数来观察RASSF4对成肌细胞分化与融合的影响。<br>　　3.在C2C12中同时过表达RASSF4-YFP和ARF6-Q67L/T44N-HA（持续GTP结合的激活状态/GDP结合的非激活状态），通过Co-IP以及免疫荧光共定位来研究RASSF4与ARF6的关系。<br>　　4.在小鼠成肌细胞C2C12中过表达RASSF4之后观察ARF6-GTP形式的表达变化。<br>　　结果：<br>　　1.RT-PCR以及qPCR结果显示在骨骼肌形成过程、骨骼肌损伤后修复过程以及体外诱导成肌细胞分化与融合的过程中，RASSF4的表达都显著上升。<br>　　2.小鼠成肌细胞C2C12过表达RASSF4后其myogenin以及myosin的表达增加，融合指数也增高；而敲低RASSF4之后，C2C12中myogenin以及myosin的表达下降，同时，其融合指数也降低。<br>　　3.小鼠成肌细胞C2C12过表达RASSF4-YFP以及ARF6-Q67L/T44N-HA之后，Co-IP结果显示，C2C12未分化时（D0）以及分化后（D2），RASSF4都可以和ARF6结合，并且优先和ARF6-T44N结合；对RASSF4-YFP+ARF6-T44N-HAC2C12进行免疫荧光染色，共聚焦显微镜观察发现，RASSF4-YFP与ARF6-T44N-HA共定位。<br>　　4.成肌细胞C2C12过表达RASSF4之后，内源性ARF6-GTP表达升高。<br>　　结论：<br>　　1.RASSF4可以促进成肌细胞的分化与融合过程。<br>　　2.RASSF4可以通过调节ARF6的活性来调节成肌细胞的融合。