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成分明确条件下定向诱导小鼠神经干细胞向少突胶质细胞分化的研究

摘要神经干细胞(Neural Stem Cells, NSCs)具有的无限自我更新能力以及多向分化潜能对由神经系统细胞的损伤或者神经系统疾病等原因造成的细胞的补充或更换提供了基本的生理功能保障。然而目前还没有高效且高产的NSCs诱导为少突胶质细胞(Oligodendrocytes,OL)的技术体系。在本论文中,我们试图开发一种成分明确条件下定向诱导分化小鼠NSCs向OL的体系。首先采用神经球为单位的传统培养体系,对基于FBS(Fibroblast Bovine Serum)的传统NSCs分化系统和新开发的基于KSR(Knock-out Serum Replacement)的NSCs分化系统进行详细的讨论和比较研究。诱导NSCs后分析RT-PCR数据发现,少突胶质前体细胞(Oligodendrocytes Progenitor Cell, OPC)的标记基因Olig2和OL的标记基因CNPase具有明显的提升。但是在诱导体系中也存在其它星形胶质细胞标志基因GFAP的上调和神经元标志基因b-3-tubulin的持续性低表达的现象。由于FBS培养基中含有大量未知因素,我们使用KSR来替代进行诱导,发现虽然Olig2和CNPase标记基因的表达量稍有减弱现象,但是有效降低了其他细胞的分化现象,并且发现KSR对于神经元方向的分化同样具有抑制作用,即b-3-tubulin出现极低的表达量。基于以上实验结果,在KSR诱导培养液中添加PDGF-AA,EGF 和Shh等对OPC及OL具有重要影响的生长因子和信号分子后发现,可以有效弥补效率低下的问题,但体系中依旧存在GFAP和Nestin基因的表达。在最后,使用层粘连蛋白和多聚-L-赖氨酸共孵育的培养皿来实现NSCs的单层水平上培养,继而继续进行诱导分化,从而消除神经球带来的异质性问题。通过优化诱导体系,共聚焦显微镜数据发现,我们在诱导NSCs的第七天成功获得了CNPase阳性OL并有效降低了Nestin阳性NSCs,减少了异质性的发生。

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