摘要目的:<br> 1.探究阿仑膦酸钠在体外对成骨细胞增殖和细胞内碱性磷酸酶活性的影响。<br> 2.探究阿仑膦酸钠在体内对骨代谢的影响,为临床治疗提供参考。<br> 方法:<br> 1.阿仑膦酸钠对成骨细胞的增殖影响:采用噻唑蓝比色试验(MTT),在培养板中诱导成骨细胞生成后,观察其生长情况,再使用不同浓度的阿仑膦酸钠作用于成骨细胞,酶联免疫检测仪测定其吸光度值。<br> 2.阿仑膦酸钠对成骨细胞合成碱性磷酸酶活性的影响:在培养瓶中诱导成骨细胞生成后,使用不同浓度的阿仑膦酸钠作用于成骨细胞,采用对硝基苯磷酸二钠法测定细胞碱性磷酸酶活性。<br> 3.阿仑膦酸钠对去卵巢SD大鼠的骨代谢影响:将收集到6W龄SD大鼠做去卵巢处理后应用阿仑膦酸钠治疗处理,在去卵巢4W、8W、12W三个时间点,对处于快速骨丢失期的大鼠进行多次采集外周血,离心后对血清中的OPG和RANKL分别用ELISA法进行检测,再计算出比值。其次,采用双能X线吸收仪(DXA),分别在阿仑膦酸钠治疗前、阿仑膦酸钠治疗26W和52W三个时间点,测量大鼠髋部、腰椎L2-4、股骨颈区、股骨大转子4个部位的骨密度值,并比较治疗前后的髋部、腰椎L2-4、股骨颈区、股骨大转子等部位骨密度的变化。<br> 结果:<br> 1.大部分的成骨细胞呈贴壁生长,24h后观察形状为长条、三角、多边及不规则形。随着实验时间的延长,成骨细胞的密度逐渐变大,成为融合成片的条索长梭形。在培养至72h,大鼠成骨细胞逐渐由之前的多边形、三角形以及长条形等形状变为卵圆形、鹅卵石形,且常出现边界不清。<br> 2.MTT检测结果显示:在24h、36h、48h时,1.0×10-5mol/L和1.0×10-4mol/L浓度的阿仑膦酸钠抑制成骨细胞的增殖作用。1.0×10-8mol/L、1.0×10-7mol/L、1.0×10-6mol/L浓度的阿仑膦酸钠促进成骨细胞的增殖作用,且1.0×10-8mol/L浓度的阿仑膦酸钠对成骨细胞的增殖促进作用最强。1.0×10-9mol/L、1.0×10-10mol/L浓度的阿仑膦酸钠对成骨细胞增殖的促进效果不明显。<br> 3.使用不同浓度的阿仑膦酸钠作用于大鼠成骨细胞72小时后,分析其对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果表明,大鼠成骨细胞在1.0×10-5mol/L和1.0×10-6mol/L浓度下的阿仑膦酸钠中的碱性磷酸酶活性增高。<br> 4.应用阿仑膦酸钠治疗12W与治疗4W相比,阿仑膦酸钠治疗后能显著升高OPG和OPG/RANKL比值。<br> 5.阿仑膦酸钠作用于SD去卵巢大鼠后,能够显著增加SD大鼠的骨密度。<br> 结论:<br> 1.不同浓度的阿仑膦酸钠对成骨细胞增殖分化和细胞内碱性磷酸酶活性影响不同。<br> 2.阿仑膦酸钠能够促进大鼠成骨分化并提高大鼠的骨密度。
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