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摘要背景:<br>　　甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)预后良好，但仍有25%的患者会出现局部淋巴结转移和复发，采用细针吸活检(fine needle aspiration biopsy，FNAB)进行细胞病理学诊断常出现阴性结果且为有创性手段，故寻找其特异性早期诊断方法使患者得到及时治疗是目前正在努力攻克的难题。课题组前期及现有研究均证实结合转化激活因子(Cbp/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich carboxy-terminal domain 1，CITED1)在PTC中表达显著上调，且可通过调节相关通路促进甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移，是治疗PTC的潜在靶点。<br>　　目的:<br>　　本研究拟使用兼顾核素显像与治疗特性的177Lu对反义肽核酸(antisense peptide nucleic acid ， asPNA )进行标记，鉴定177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA的理化性质并评估其用于荷甲状腺乳头状癌裸鼠模型SPECT/CT显像及治疗的可行性，为PTC患者寻找一种无创、靶向性强的诊断方法，并从基因层面寻找治疗途径。<br>　　方法:<br>　　1.177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA的制备、性质鉴定：实时荧光定量PCR(RT-PCR)鉴定PNA的靶向特异性。177Lu通过间接标记法得到反义探针177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA，采用薄层层析法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)测定其标记率、放射化学纯度及体内外生理稳定性。<br>　　2.体外细胞实验：使用γ计数仪测定反义探针的摄取及滞留能力，CCK-8法及流式细胞术检测反义探针对体外培养的K1细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用。<br>　　3.177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA在荷瘤裸鼠体内的生物分布、SPECT/CT显像及治疗效果评估：构建荷甲状腺乳头状癌K1细胞株裸鼠模型，将20只裸鼠随机分为四组于尾静脉注射177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA后，4、12、24、48h取肿瘤组织和重要组织器官进行生物分布研究；与此同时，取3只裸鼠于以上各时间点分别进行SPECT/CT显像。另取荷瘤裸鼠30只(10只/组)，分为0.9%生理盐水处理组、177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA处理组、anti-CITED1-PNA处理组，通过测量肿瘤体积、记录裸鼠生存周期绘制肿瘤生长曲线并进行生存分析，以此评估177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA对荷瘤裸鼠的治疗作用。<br>　　结果:<br>　　1.RT-PCR显示反义肽核酸作用于K1细胞后能明显降低CITED1的表达；反义探针的放射化学纯度为(96.5±0.15)%，比活度为(8.7±0.53)MBq/μg，PNA标记物分别在PBS及人血清模拟的体内环境中孵育48h后放射化学纯度均大于91%。<br>　　2.体外细胞摄取、滞留实验显示反义探针能被人K1细胞特异性摄取且相较于无义探针能长时间滞留于胞内；CCK-8实验显示177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA较未偶联的177Lu和anti-CITED1-PNA具有显著的抑制K1细胞增殖作用(P值均＜0.01)；流式细胞术凋亡检测显示177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA较anti-CITED1-PNA(P<0.001)及对照组(P<0.0001)能明显诱导细胞凋亡，差异有统计学意义。<br>　　3.荷瘤裸鼠体内生物分布显示177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA注射后4h，肿瘤组织、肝、脾、肾、血中放射性浓度均较高，脑组织未见明显吸收，瘤/肌肉比于24h达最高(4.98±0.34)。SPECT平面及融合图像显示注射后24h时，177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA在肿瘤部位清晰显影，T/NT值达到峰值5.11，与正常组织对比明显。<br>　　4.通过测定荷瘤裸鼠的肿瘤体积，177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA组在注射后9天肿瘤大小出现显著性差异(P＜0.05)。177Lu-DOTA-anti字-CITED1-PNA组、anti-CITED1-PNA组及生理盐水组的中位生存期分别为43天、30天和27天。Kaplan-Meier生存曲线显示，177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA组总生存率与anti-CITED1-PNA组和生理盐水组均有显著差异(P=0.002,logranktest)。<br>　　结论:<br>　　1.成功制备了177Lu标记的CITED1mRNA反义肽核酸探针，其标记过程简单、放化纯高。体内外稳定性好，适用于后续体内外研究。2.177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA能被K1细胞特异性摄取，K1细胞的增殖能力显著降低，细胞凋亡率明显增加。<br>　　3.177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA在荷PTC裸鼠模型中肿瘤清晰显影，且在抑制瘤体增长的同时有效延长裸鼠生存周期，有希望为甲状腺乳头状癌患者提供复发或远处转移早期诊断及治疗新途径。