摘要目的:研究低氧预处理人羊膜间充质干细胞是否对鼠放射性损伤涎腺上皮细胞具有保护及功能修复作用。<br> 方法:(1)3天大的SD大鼠新生鼠取其双侧下颌下腺腺体组织,利用酶消化法分离下颌下腺的细胞,胰蛋白酶差速消化法和差速贴壁法纯化原代细胞;(2)下颌下腺细胞传至P2时,使用免疫组织化学法对细胞的角蛋白7(CK-7)进行鉴定;(3)遵义医科大学组织工程实验室提供P3人羊膜间充质干细胞,并行流式细胞仪行细胞表型鉴定;(4)实验分为4组;空白对照组(颌下腺上皮细胞未行放射处理组)、5Gy放射对照组(颌下腺上皮细胞行5Gy放射处理但不和hAMSCs共培养组)、低氧共培养组(低氧预处理hAMSCs和颌下腺上皮细胞5Gy放射后共培养7天组)、常氧共培养组(hAMSCs和颌下腺上皮细胞5Gy放射后共培养处理7天组);(5)利用电子直线加速器对P3代大鼠下颌下腺上皮细胞行5Gy放射处理;(6)按既定分组共培养7天后,分别收集每组细胞上清液,使用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组下颌下腺上皮细胞唾液淀粉酶α1(AMY1)的含量;CCK-8(Cell Counting Kit-8)技术检测各组细胞的增殖活性;Annexin V-FITC/PI流式细胞技术对各组细胞的凋亡进行检测;应用Quantitative real-time-PCR检测各组细胞AQP5mRNA的表达量。<br> 结果:(1)P2大鼠下颌下腺上皮细胞生长形态均一,呈铺路石样排列、贴壁生长,鼠下颌下腺细胞CK7呈阳性表达,证明该细胞为上皮来源。(2)P3hAMSCs生长形态较为均一,细胞呈长梭形、漩涡状并且贴壁生长。流式细胞仪鉴定示:hAMSCs高表达CD44、CD73、CD90和CD105,低表达CD11b、CD19、CD34、CD45及HLA-DR。(3)按既定分组共培养7天后行细胞功能的相应检查,唾液α-淀粉酶含量测定:空白对照组明显高于共培养组,5Gy放射对照组含量最低(P<0.05),低氧共培养组较常氧共培养组淀粉酶含量有升高趋势,但是差异不具有统计学意义。(4)细胞增殖活性cck-8示:空白对照组的细胞增殖活性比共培养组高,5Gy放射对照组最低,低氧预处理组比常氧组高(P<0.05)。(5)流式细胞仪检测细胞凋亡示:空白对照组凋亡最低,5Gy放射对照组最高(P<0.05),低氧共培养组较常氧共培养组有升高趋势,但是差异不具有统计学意义。(6)Quantitative real-time-PCR检测各组细胞AQP5mRNA示:空白对照组的表达量是最高的,5Gy放射对照组表达量是最低的,共培养组居中,组间差异均具有统计学意义(P<0.05),低氧预处理hAMSCs后共培养组较常氧共培养组有升高趋势,但是差异不具有统计学意义。<br> 结论:hAMSCs共培养对放射性损伤颌下腺上皮细胞具有具有保护及功能修复作用;低氧预处理hAMSCs共培养对放射性损伤颌下腺上皮细胞的保护及功能修复作用较常氧hAMSCs共培养组有提高趋势。
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