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拟南芥EMB1270调控叶绿体发育的机理研究与PPR蛋白功能分析新方法

摘要PPR(Pentatricopeptide repeat)蛋白是由35个氨基酸为基序的串联重复组成,在所有真核生物中保守。PPR蛋白结合单链RNA,参与细胞器基因的转录后调控,包括RNA切割、剪接、编辑和稳定等。PPR蛋白在高等植物中最为丰富,是陆生植物中最大的蛋白质家族之一,这是因为植物需要众多PPR蛋白来调控叶绿体和线粒体基因的表达,其中很多是植物生存所必需的基因。在本研究中,我们通过筛选叶绿体发育缺陷突变体,得到了拟南芥EMB1270的一个弱等位突变体,emb1270-2。它在幼苗时期表现出子叶黄化并逐渐转绿的表型,其PSII最大光化学量子产量(Fv/Fm)显著低于野生型。EMB1270编码一个定位于叶绿体的且具有24个PPR模体的P亚家族蛋白,其敲除突变体emb1270-1呈现胚胎致死表型。我们发现在emb1270-2突变体中叶绿体基因clpP1intron2和ycf3intron1的剪接效率显著降低。进一步研究发现EMB1270与两个叶绿体定位的剪接因子蛋白CAF1和CFM2相互作用,由此我们推测EMB1270协同CAF1和CFM2特异性调控叶绿体clpP1intron2和ycf3intron1的剪接。<br>  由于许多PPR蛋白的缺失导致胚胎致死,因此敲除突变体难以用于这些PPR蛋白的功能研究。在本研究中,我们发现通过在野生型中过量表达一个突变的PPR基因,导致其内源基因的转录后沉默(post-transcriptional gene silencing,PTGS),也称为共抑制(co-suppression)。这样的转基因株系类似于knockdown植株,从而为研究PPR蛋白,特别是胚胎致死型PPR蛋白的功能提供了一种替代方法。利用这种方法,我们创建了一个功能未知、胚胎致死型PPR蛋白——EMB976的共抑制株系,并找到了EMB976调控的位于叶绿体中的可能靶基因——ycf3和clpP1。

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