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摘要目的：<br>　　3,3'-二吲哚甲烷（3,3'-diindolylmethane，DIM）是存在于十字花科芸苔属蔬菜中的一种植物化学物，DIM能在体内外诱导包括胃癌细胞在内的多种肿瘤细胞凋亡，但其对胃癌细胞凋亡诱导的分子机制尚未彻底阐明。在本课题研究中，我们的主要目的是阐明DIM诱导胃癌细胞凋亡的分子机制。为以DIM为代表的植物化学物应用于胃癌防治药物研发提供理论依据，同时为基于胃癌的分子诊断提供新的靶标。<br>　　方法：<br>　　1.用DIM处理人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901以及人正常胃粘膜上皮细胞株GES-1，用MTT法比较其细胞活力；蛋白免疫印迹（Western Blot）检测增殖及细胞周期相关蛋白：抗增殖蛋白p21，细胞周期蛋白依赖性激酶4（cyclin-dependent kinase4，CDK4），细胞周期蛋白Cyclin D1。<br>　　2.TUNEL试剂盒检测BGC-823与SGC-7901细胞凋亡水平；Western Blot检测凋亡相关蛋白：剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase3），裂解的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved poly ADP ribose polymerase，cleaved PARP），B细胞淋巴瘤因子2（B cell lymphoma-2，Bcl-2）及其相关X蛋白（Bcl-2associated X protein，Bax）的表达。<br>　　3.观察DIM对p38丝裂原活化蛋白激酶（p38mitogen-activated protein kinase，p38MAPK）的影响，p38MAPK特异性抑制剂SB203580预处理后与DIM联用，观察抑制p38MAPK通路后对上述增殖及凋亡相关指标的改变。<br>　　4.用TNF受体相关因子2（TNF receptor associated factor2，TRAF2）抗体对15例胃癌患者的胃癌组织与癌旁组织标本进行免疫组织化学分析，比较TRAF2在胃癌和非癌组织中的表达，同时用Western Blot检测TRAF2在BGC-823、SGC-7901和GES-1细胞中的表达水平；用TRAF2siRNA转染BGC-823和SGC-7901细胞，观察TRAF2敲减后对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。<br>　　5.观察DIM影响下TRAF2的变化，运用TRAF2过表达质粒转染后与DIM联用，观察TRAF2过表达后对增殖、凋亡的影响。<br>　　结果：<br>　　1.DIM显著降低BGC-823、SGC-7901的细胞增殖活性并呈剂量-效应和时间-效应关系，而GES-1细胞对DIM的敏感性相对较低。Western Blot检测p21在DIM作用下逐渐升高，CDK4和Cyclin D1的表达水平显著降低。<br>　　2.TUNEL实验表明DIM可显著诱导BGC-823、SGC-7901细胞凋亡。Western Blot结果表明DIM以浓度依赖方式增加了cleaved caspase3，cleaved PARP和Bax的表达，凋亡的相关指标Bax/Bcl-2比值也升高。<br>　　3.Western Blot表明DIM能激活p38MAPK通路，其抑制剂SB203580与DIM联用后，DIM诱导的胃癌细胞增殖抑制、凋亡诱导效应被回复。<br>　　4.免疫组织化学分析发现TRAF2的表达水平在胃癌组织显著高于癌旁组织；Western Blot发现在BGC-823、SGC-7901中TRAF2的蛋白表达水平显著高于GES-1。用TRAF2siRNA转染胃癌细胞株后，胃癌细胞的增殖受抑制，但促进凋亡，并激活p38MAPK信号通路。<br>　　5.Western Blot检测表明DIM可呈浓度依赖性降低TRAF2的表达，TRAF2的过表达质粒转染胃癌细胞后再与DIM共处理，p38MAPK激活被抑制，也同时减弱了DIM对胃癌细胞凋亡的诱导效应。<br>　　结论：<br>　　DIM能在BGC-823、SGC-7901胃癌细胞中呈浓度依赖性抑制细胞增殖，诱导凋亡；TRAF2在人胃癌组织及细胞中均呈高表达状态，TRAF2表达的下调与胃癌细胞增殖抑制、凋亡诱导相关。DIM主要通过调控TRAF2/p38MAPK轴实现对胃癌细胞的抑制作用。综上所述，TRAF2是DIM抑制胃癌的关键调控靶点，DIM抗胃癌主要通过TRAF2/p38MAPK轴诱导胃癌细胞凋亡。