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红芪治疗UC有效部位的提取分离及作用机制研究

摘要目的:<br>  红芪是补益类中药,为甘肃道地药材之一,具有补气升阳、敛疮生肌等功效,其主要含有多糖、皂苷、黄酮等活性成分。溃疡性结肠炎是临床常见病,结肠溃疡引起的炎症反应与机体的免疫异常有密切的关系。现代研究表明,红芪具有抗炎和调节免疫等药理作用。因此本课题研究从红芪不同提取部位主要成分的提取分离出发,探讨红芪对小鼠溃疡性结肠炎的作用及物质基础,研究其发挥作用的机制,以期为红芪治疗溃疡性结肠炎提供理论依据。<br>  方法:<br>  1.依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、水系统溶剂提取法提取红芪,得红芪不同提取部位。另取红芪水煎煮,得红芪全药水提取物。<br>  2.分别采用苯酚-浓硫酸、香草醛-冰醋酸-高氯酸、亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色法,分别以D(+)-无水葡萄糖、黄芪甲苷、芦丁为对照品,测定红芪及其不同提取部位中总多糖、总皂苷、总黄酮的含量。<br>  3.以2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠复制溃疡性结肠炎小鼠模型,通过药物干预,观察小鼠粪便性状,评价结肠宏观病变,观察结肠病理变化并测定结肠含水量及血清TNF-α、IL-6、IL-10的水平,考察红芪对小鼠溃疡性结肠炎的作用及物质基础。<br>  4.采用传统水提醇沉法得到红芪总多糖,依次用无水乙醇、丙酮脱色,Sevage法脱蛋白,得脱蛋白红芪多糖。<br>  5.采用Sephadex G-100柱色谱法对脱蛋白红芪多糖进行分离,以流速为0.5~0.8mL·min-1蒸馏水洗脱,每3mL收集洗脱液,苯酚-浓硫酸法跟踪检测,绘制洗脱曲线。合并主峰流出液,醇沉脱色,干燥得红芪多糖HG-3。<br>  6.采用茚三酮反应、碘-碘化钾反应及聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别红芪多糖HG-3的纯度;中红外光谱、薄层色谱、GC-MS分析红芪多糖HG-3的组成;采用水相GPC测定红芪多糖HG-3分子量;苯酚-浓硫酸法测定红芪多糖HG-3的含量。<br>  结果:<br>  1.通过系统溶剂提取法提取红芪,依次得到石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、水系统溶剂提取法提取部位,提取率分别为0.34%、0.25%、0.33%、34.20%、11.50%。另取红芪水煎煮,得红芪全药水提取物,提取率为41.73%。<br>  2.以紫外分光光度法测定红芪及其不同提取部位中主要成分的含量,结果显示:红芪、红芪系统溶剂提取法水提取部位、红芪全药水提取物中总多糖含量分别为10.26%、79.76%、82.50%;红芪及其石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、水系统溶剂提取法提取部位、红芪全药水提取物中总皂苷含量分别为4.164%、0.161%、0.124%、0.177%、2.174%、0.454%、2.560%;总黄酮含量分别为0.389%、0.030%、0.032%、0.031%、0.345%、0.035%、0.474%。<br>  3.药理实验结果显示,与模型组比较,红芪及其系统溶剂提取法提取部位(除石油醚提取部位),可有效改善溃疡性结肠炎小鼠体重、粪便性状及隐血情况(P<0.01),同时降低CMDI评分、结肠含水量及组织病理学综合评分(P<0.05,P<0.01),升高小鼠血清IL-10水平、降低TNF-α及IL-6水平(P<0.01)。以上实验结果揭示红芪对溃疡性结肠炎小鼠有很好的治疗作用。<br>  4.水提醇沉得到的红芪总多糖呈灰白色粉末,得率为4.68%;脱蛋白后的红芪多糖呈类白色,脱蛋白率为43.5%。<br>  5.经Sephadex G-100柱色谱法分离得到的红芪多糖HG-3呈白色粉末,质地松散,得率为22.56%。<br>  6.茚三酮反应、碘-碘化钾反应及聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,红芪多糖HG-3为纯度较高的多糖;中红外光谱结果显示,HG-3满足多糖的一般特征,可能为β-吡喃型多糖;薄层色谱、GC-MS结果显示,HG-3是由葡萄糖一种组分组成的多糖;水相GPC测定HG-3的分子量,结果Mn:4.25E+03、Mw:2.89E+04、Mz:3.44E+05、Mw/Mn:6.79;苯酚-浓硫酸法测得HG-3的含量为96.79%。<br>  结论:<br>  本实验对红芪及其不同提取部位进行总多糖、总皂苷及总黄酮的含量测定,结果显示红芪全药水提取物中总多糖含量高于红芪系统溶剂提取法水提取部位中总多糖含量;相较于各提取部位,总皂苷及总黄酮含量均在红芪全药水提取物中最高;分别将红芪系统溶剂提取法各提取部位中总皂苷、总黄酮的含量代数加和,发现其分别高于红芪全药水提取物中总皂苷、总黄酮的含量,说明相较单一的溶剂提取,系统溶剂提取法能更全面的提取红芪化学成分,并使其因极性不同而分布于不同的提取部位中。药理实验显示,与模型组比较,红芪全药水提取物及乙醇、水系统溶剂提取法提取部位对小鼠溃疡性结肠炎有明显的治疗作用,而降低TNF-α及IL-6水平,升高IL-10水平为其作用机制之一,同时也揭示了其物质基础可能主要为红芪多糖,而红芪总皂苷及总黄酮也有一定的作用。对Sephadex G-100柱色谱分离得到的红芪多糖HG-3进行分析,显示其满足多糖的一般红外特征,且是由葡萄糖一种组分组成的多糖。本研究可为红芪治疗溃疡性结肠炎提供开发利用价值,为红芪资源的开发利用提供参考。

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导师 郭玫
学位信息:
甘肃中医药大学 中药学 中药学(硕士) 2020年
分类号 R282.71
发布时间 2020-11-06
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