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摘要神经肽FF是属于RFamide相关肽家族中的一种八肽，在多种生物过程中具有调节功能。本文克隆了小黄鱼（Larimichthys polyactis）神经肽FF相关基因（LpNPFF：Accession No.MT012894）及其两种受体（LpNPFFR1：Accession No.MT012894和LpNPFFR2：Accession No.MT12896）。序列分析结果显示小黄鱼神经肽FF相关基因cDNA全长835bp，开放阅读框（ORF）编码了127个氨基酸残基，包含一个21个氨基酸残基的信号肽和两个成熟的PQRFamide肽，预测其蛋白质相对分子量（MW）为29.8kDa，等电点（pI）为5.90。LpNPFFR1和LpNPFFR2属于典型的G蛋白偶联受体家族，均具有7个跨膜区域，他们的ORF区域分别编码了427和444个氨基酸残基。多序列同源性比对与系统进化树分析结果显示小黄鱼神经肽FF及其两种受体基因皆与大黄鱼（Larimichthys crocea）的亲缘关系最近；RT-PCR和RT-qPCR结果显示，小黄鱼神经肽FF及其受体基因在性未成熟期（第Ⅱ期）的小黄鱼的脑和性腺中表达含量较高，其次是头肾和肾脏，在心脏和脾脏中也有表达；原位杂交结果显示，在小黄鱼中脑的视顶盖（OTec）、圆环体（TL）、结节前核（NAT）、外侧结节核（NLT）、下丘脑弥散核（NDLI）以及延脑（MO）中检测到大量LpNPFF mRNA阳性的细胞，而端脑和小脑部分的表达较少，这可能表示LpNPFF通过不同的途径向不同组织传递信号。并且在第Ⅱ期的小黄鱼卵巢细胞的细胞质中也能观察到明显的阳性信号；免疫组织化学结果显示，在小黄鱼脑部表层细胞和卵巢壁周围的结缔组织中可见明显的RFamide免疫阳性纤维；本实验还探究了LpNPFF对中国仓鼠卵巢细胞（CHO-K1）蛋白分泌活性和小鼠巨噬细胞（RAW264.7）一氧化氮（NO）产生量的影响。体外细胞实验的结果表明，0.01μM~10μM的LpNPFF（1）和0.01μM、0.1μM的LpNPFF（2）对CHO-K1细胞总蛋白分泌活性抑制效果具有显著性（p<0.05）。0.01μM~100μM的LcGnRH3对CHO-K1细胞总蛋白的分泌量具有促进作用（p<0.05），当LpNPFF两个RFamide成熟肽分别和LcGnRH3共同作用于细胞时，LpNPFF（0.01μM~100μM）对由LcGnRH3引起的蛋白分泌量增加起到明显的抑制作用（p<0.05）。LpNPFF（1）和LpNPFF（2）能够抑制静止和LPS活化状态下RAW264.7细胞中NO的产生；此外，通过NPFF受体拮抗剂（RF9）初步验证了配体与受体之间的相互作用，RF9能够阻断配体与受体的结合，也进一步证明LpNPFF抑制了细胞分泌NO的量。上述研究结果有助于神经肽进化的进一步研究，也为进一步探索NPFF相关基因在生殖调控方面的功能提供了新的思路。