检索历史 清除

摘要每日大便3次以上、粪便稀软、24小时粪便量超过200克，或每日粪便量小于200克，但便次超过3次，伴肛门周围不适、里急后重或大便失禁的症状称腹泻[1]。腹泻是全球重大公共卫生问题之一，每年造成全球约76万儿童的死亡，虽是一种常见疾病，却是引起全球5岁以下儿童死亡的第二大原因，也是造成儿童营养不良的主要原因。将其按病因学分类分为感染性腹泻和非感染性腹泻。感染性腹泻是由细菌、真菌、病毒或寄生虫引起的以腹泻为主要临床表现的肠道传染病，其发病率高、流行面广，是危害人类身体健康的重要疾病。亚洲、拉丁美洲、非洲地区每年因腹泻而死亡者大多数为5岁以下儿童，约500万以上，年发病数约7.50亿~10.00亿人次[2]。在我国每年约8.36亿人次发生感染性腹泻，而2~14岁以下儿童约达6.78亿人次[3]。细菌性腹泻占所有感染性腹泻病例的50%~60%，主要发生在炎热夏季(6月~8月为主)，以大肠埃希菌属和志贺菌属为主，由轮状病毒(Rotavirus，RV)、星状病毒(Astrovirus，AsV)、腺病毒(Adenovirus，AdV)、诺如病毒(Norovirus，NV)等多种病毒所引起的腹泻病称作病毒性腹泻，是引起儿童感染性腹泻的主要病因[1]。其中RV是引起婴幼儿腹泻的最主要病原之一，所致腹泻也称秋季腹泻，据统计全球5岁以下儿童中95%至少经历过1次RV感染，其中有1/5需要到医院进行就诊治疗，1/65需要住院，约1/293患儿发生死亡[4]。NV是目前公认的导致人类非细菌性急性肠炎暴发的主要原因[5]，日本胃肠炎暴发病例中有60~85%与NV有关，在美国，高达93%的腹泻暴发与此病毒相关[6]；由真菌和寄生虫引起的感染性腹泻较少，致泻寄生虫以溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica, E. histolytica)、蓝氏贾第鞭毛虫和隐孢子虫为主。本研究通过样本预处理、腹泻病原体基因检测、札如病毒(Sapovirus, SaV)、AsV及AdV荧光定量PCR法检测、轮状病毒A组(Human Rotavirus A, RVA)病毒-细胞分离法、RVA荧光定量PCR法检测、RVAG/P基因分析PCR法检测及RVA二代全基因组测序等一系列的实验室诊断去检测来自广东省珠三角地区3个哨点医院(广东省妇幼保健院、广东省东莞市东华医院(中山大学附属东华医院)、广东省江门市人民医院)2019年1月1日至2020年1月12日期间就诊的腹泻患者病例的粪便样本后，采用一定的统计学方法进行分析，了解广东省珠三角地区2019年感染性腹泻分子流行病学特征、病原谱及重点病原监测，为完善相关预防措施提供数据支持。<br>　　研究对象和方法<br>　　将“十三五重大专项”中腹泻病症候群监测的珠三角地区3个哨点医院：江门市人民医院、东莞市东华医院(中山大学附属东华医院)、广东省妇幼保健院中入院诊治的腹泻患者作为研究对象。入选条件：1)符合相关诊断病例定义(《感染性腹泻诊断标准(WS271—2007)》：腹泻定义，每日大便大于等于3次、粪便稀软、24小时粪便量超过200克，或每日粪便量小于200克，但便次超过3次，伴肛门周围不适、里急后重或大便失禁的症状；感染性腹泻病例定义，由病原微生物及其产物或寄生虫所引起的、以腹泻为主要临床特征的一组肠道传染病，本标准则仅指除霍乱、痢疾、伤寒、副伤寒以外的感染性腹泻；2)有临床基本信息，性别、年龄、婚姻状况、职业、联系方式、临床症状(或体征)入院时间、出院时间等资料；3)粪便检测阳性。<br>　　通过筛选3个哨点医院中符合腹泻病病例定义的就诊患者，采集患者的粪便样本，同时填写病例个案调查表和收集患者粪便常规检验结果后送检。在收到送检的腹泻样本核对信息无误后，利用xTAG○RGastronintestinalPathogenPanel(xTAG○RGPP)进行腹泻病原体基因检测，对RVA阳性的样本，利用MA104细胞进行病毒分离，对产生CPE的细胞培养物进行荧光定量PCR法检测，阳性者进行RVA半巢式G/P基因分型PCR法检测，最后，对分出型别者进行全基因组测序。收集所有有效信息，进行数据录入和数据分析，最后得到结果和结论。<br>　　采用Epidata3.1建立数据库实行双录入，采用SPSS22.0软件进行统计分析。连续性变量采用均数±标准差(±s)或者中位数(P25, P75)表示，分类变量采用率或构成比表示。均数的组间比较采用t检验、方差分析、Mann-WhitneyU检验等统计分析方法；率或者构成比的比较采用χ2或Fisher检验；利用GraphPadPrism8软件进行图表绘制。所有统计分析均采用双侧检验，以α=0.05为检验水平，P＜0.05认为差异有统计学意义。<br>　　结果<br>　　1、广东省珠三角地区腹泻病流行概况<br>　　1.1腹泻病例流行特征<br>　　2019年1月1日~2020年1月12日期间，累计纳入合格腹泻病例706例，患者年龄中位数为1.25(0.92~5.00)岁，男女性别比为1.46：1。就诊者中≤5岁患者占总就诊人数的76.20%(538/706)，其中6月~1岁者占比最多，为45.72%(246/538)。入院就诊的患者73.51%体温正常(36.00℃~37.00℃)，仅0.85%的患者出现高热(39.10℃~41.00℃)，无患者出现超高热症状(＞41.00℃)；60.34%的患者无呕吐症状；患者粪便性状超过一半为水样便(49.72%)，但有37.68%的患者的粪便性状被归为“其他”(非水样便、米泔样便、粘液便、脓血便、洗肉样便、鲜血样便、黑便中的任何一种)；有39.66%的患者表示在样本采集前未使用过抗生素；患者每日腹泻次数最多为10次以上，本次研究60.06%的患者表示自己每日腹泻次数6次以上；男女之间就诊率在患者的不同年龄、就诊时间、体温情况、呕吐次数、粪便性状、标本采集前是否使用抗生素等方面的差异均无统计学意义，而男女之间就诊率在患者腹泻次数间有统计学差异(χ2=706，P=0.000)，且男性腹泻患者更容易因为腹泻次数增多的入院就诊治疗。3个哨点医院累计入院就诊的706例腹泻病例中，腹泻患者就诊最高峰期在2月-3月，占全年接诊腹泻人次的29.32%(207例)、次高峰期7月-8月(149例)、三峰出现在12月；≤5岁腹泻就诊病患累计538例，其就诊高峰期出现在2月至3月，8月，10月以及12月，就诊最高峰期占该年龄组全年腹泻病就诊人数的57.62%。来院就诊的腹泻病例病原体检出数304例，总检出率为43.06%，其中男女性别比为1.41：1(178：126)，男女之间检出率差异无统计学意义(χ2=0.430,P=0.538)，检出者年龄中位数为1.02(0.83~2.19)岁，主要累及≤5岁患儿检出者，最大检出者54岁，最小检出者仅1月零1天，病原体检出者就诊高峰期出现在2月-3月、7月及11月-12月；<br>　　1.2腹泻病例病原谱分析结果<br>　　感染性腹泻病原谱前5位为RVA、NVGII、沙门氏杆菌、艰难梭菌芽孢杆菌A/B毒素和肠产毒素性大肠杆菌不耐热肠毒素/耐热肠毒素；全年未检出小肠大肠耶尔森杆菌。致泻病原体检出率：病毒＞细菌＞寄生虫；≤5岁患儿是检出感染性腹泻病原体种类和数量最多的群体；致泻病毒病原谱前4位为RVA、NVGII和NVGI和AdV；沙门氏杆菌、艰难梭菌芽孢杆菌A/B毒素、肠产毒素性大肠杆菌不耐热肠毒素/耐热肠毒素和弯曲杆菌(空肠弯曲菌、结肠弯曲菌)是细菌病原谱前4位；在3种可检测寄生虫(蓝氏贾第鞭毛虫、隐孢子虫和E.histolytica)中，以检出蓝氏贾第鞭毛虫和隐孢子虫为主；在检出病原体阳性的腹泻样本中，以单一感染为主，感染率为23.78%，其中又以RVA(36.90%)和NVGII(21.42%)的单一感染为主；双重感染病例中，以沙门氏杆菌合并其他病原体、NVGII合并其他病原体以及RVA合并其他病原体感染为主；<br>　　2、广东省珠三角地区重点病原体监测结果<br>　　2.1RVA和NV主要感染群体均是≤5岁腹泻患者，其中RVA和NVGI检出高峰年龄均位于6月龄~1岁；RVA、NVGI、NVGII男女性别比分别为：1.78(66：37)、2.50：1(15：6)和1.74：1(59：34)且男女之间检出率差异均无统计学意义，三者高发季节均主要位于寒冷季节；NVGII腹泻患者比感染RVA者更容易每日腹泻次数≥10次；<br>　　2.2RVA基因系统进化分析<br>　　80份有CPE的RVA细胞培养物的半巢式PCR结果显示，RVAG/P分型主要为G9P[8]、G3P[8]、G2P[4]，其中G9P[8]占75.00%(60/80)，其次G3P[8]占6.25%(5/80)，最后G2P[4]为2.50%(2/80)，此外还有13份未分出型别。<br>　　通过半巢式PCR被成功分型的50株RVA细胞培养物的全基因组测序结果显示，成功测序45株，其中34株G9P[8]分离株中有15株基因组属于Wa-like基因组(G9-P[8]-I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E1-H1)，有19株其NSP4片段发生了基因重配，分型特征为G9-P[8]-I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E2-H1，其次5株G3P[8]分离株中有3株发生了DS-1-like与Wa-like基因组间重配，其分型特征为G3-P[8]-I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E2-H2，而另外2株仍属于Wa-like基因组(G3-P[8]-I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E1-H1)，而2株G2P[4]分离株均为DS-1基因组(G2-P[4]-I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E2-H2)。此外还测出1株G2P[x]和3株GxP[8]。VP7基因片段系统进化树结果显示，G2分离株位于同一分支，毒株间核苷酸同源性99.80%~100.00%，G3型分离株分列2个分支，分支内毒株核苷酸同源性为100%，分支间毒株核苷酸同源性为77.40%，G9型分离株分属于2支进化簇，分支内毒株核苷酸同源性为100.00%，分支间毒株核苷酸同源性为93.80%~94.10%；VP4基因片段系统进化树结果显示，P[4]型分离株位于同一分支，毒株间核苷酸同源性为99.08%，P[8]型分离株分列2大进化支，同支毒株间核苷酸同源性为100.00%，不同支毒株间核苷酸同源性也高达95.00%~99.60%。与对应型别的毒株相比，VP4和VP7基因片段的抗原决定区均出现了多个氨基酸位点的突变。此外，在NSP4基因片段的ASII和ASIII中也检测到氨基酸变异。<br>　　结论<br>　　本研究表明RVA和NVGII是广东省珠三角地区2019年感染性腹泻的主要重点病原体且感染性腹泻病原谱前5位为RVA、NVGII、沙门氏杆菌、艰难梭菌芽孢杆菌A/B毒素和肠产毒素性大肠杆菌不耐热肠毒素/耐热肠毒素。病毒性腹泻主要发生于寒冷季节，主要病原体为RVA和NVGII；而夏季则是细菌性腹泻的高发期，主要病原体为沙门氏杆菌；蓝氏贾第鞭毛虫是寄生虫性腹泻的主要病因。≤5岁儿童是感染性腹泻的主要受累群体且引起其腹泻的病原体主要是RVA、NVGII、沙门氏杆菌、艰难梭菌芽孢杆菌A/B毒素和蓝氏贾第鞭毛虫。当前珠三角地区RVA主要流行株为G9P[8]，且其部分片段发生了重组。因此，在进行腹泻病原体常规监测的同时，仍需持续关注重点病原体(RVA和NV)的流行情况，尤其应加强对RVA毒株流行特点、基因型别变化及基因组重配的研究，为预防和控制RVA感染提供科学依据。