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摘要Nur77是一种孤儿核受体，在炎症和免疫调节中发挥着重要作用，但在肠道病原菌感染导致的炎症性疾病中，Nur77与粘液层、抗菌肽和肠道菌群间的关系尚不清楚。<br>　　因此，本研究首先比较了野生型和Nur77-/-C57BL/6公鼠对柠檬酸杆菌易感性的差异；然后利用野生型和Nur77-/-C57BL/6公鼠，探究了Nur77对肠道粘液层厚度、抗菌肽表达和肠道菌群组成的影响，利用mode-k小鼠小肠上皮细胞和原代小鼠结肠上皮细胞，探究了Nur77对肠上皮细胞抗菌肽基因表达的影响，揭示了Nur77与抗菌肽和肠道菌群间的潜在联系，以期明确Nur77对粘液层、抗菌肽和肠道菌群的调控作用。主要研究内容和结果如下：<br>　　第一部分Nur77对小鼠柠檬酸杆菌易感性的影响<br>　　取10周龄野生型(Wild type，WT)和Nur77-/-C57BL/6公鼠各20只，各分为两组，分别在灌服柠檬酸杆菌后第8d和第21d屠宰取样。试验期间，每天记录体重和死亡情况，测定粪便中柠檬酸杆菌数量；屠宰后，称量肝、脾和肾脏重量，记录结肠长度，并测定肝脏、脾脏和肾脏中柠檬酸杆菌数量，研究了Nur77对柠檬酸杆菌的易感性的影响。结果表明，与WT小鼠相比：<br>　　Nur77-/-小鼠死亡率无显著变化，但体重下降迅速，恢复缓慢，灌服柠檬酸杆菌第7d和第8d时，体重变化率出现显著差异(P<0.05)。灌服柠檬酸杆菌第8d，Nur77-/-小鼠结肠显著缩短(P<0.05)，结肠中细胞因子IL-13和IL-22表达未显著上调，且与野生型小鼠差异显著(P<0.05)；灌服柠檬酸杆菌第8d，小鼠内脏指数(肝脏、脾脏和肾脏)无差异，但第21dNur77-/-小鼠肾脏指数显著增加(P<0.05)。用涂布稀释计数法测定柠檬酸杆菌定植量，结果发现，Nur77-/-小鼠粪便载菌量无显著差异，但肝脏、脾脏和肾脏组织载菌量显著增加(P<0.05)，表明Nur77-/-小鼠对柠檬酸杆菌的易感性增加。<br>　　第二部分Nur77对小鼠肠道粘液层和抗菌肽的影响<br>　　选取10周龄WT和Nur77-/-C57BL/6公鼠各13只，屠宰后采集空肠和结肠组织样，研究Nur77对小鼠肠道粘液层和抗菌肽的影响。主要结果如下：<br>　　1.对小鼠结肠粘液层的影响：PAS染色结果表明，与WT相比，Nur77-/-小鼠结肠粘液层厚度及分泌粘液的杯状细胞数量无显著差异；结肠组织中MUC2mRNA的表达显著下调(P<0.05)，但蛋白表达无显著差异。<br>　　2.对小鼠肠道抗菌肽和潘氏细胞数量的影响：HE染色结果表明，与WT相比，Nur77-/-小鼠空肠潘氏细胞数量显著减少。qPCR结果表明，Nur77-/-小鼠空肠潘氏细胞来源的抗菌肽(包括Defa1、Defa5、cryptdin1、cryptdin2、cryptdin5、lyz-1和lyz-2)基因mRNA表达显著下调(P<0.05)；但空肠和结肠中非潘氏细胞来源的抗菌肽，包括Defb2和PLA2基因mRNA表达显著上调(P<0.05)，而pglyrl-1和Ang4显著下调(P<0.05)；空肠中Defb6和CAMP，结肠中reg3g和reg3b基因mRNA表达显著下调(P<0.05)。Westernblot结果显示，结肠中Defb2、reg3g和Ang4蛋白表达与qPCR结果一致。<br>　　3.对下游靶基因的影响：分离培养小鼠原代结肠上皮细胞，qPCR检测预测的Nur77靶基因Ang4、reg3b和reg3gmRNA的表达。结果表明，与WT相比，Nur77-/-小鼠原代结肠上皮细胞中，reg3b和reg3g基因mRNA表达显著下调(P<0.05)，与Nur77-/-小鼠结肠组织qPCR结果一致。在mode-k细胞中过表达Nur77，reg3b和reg3g基因mRNA表达显著上调(P<0.05)。<br>　　第三部分Nur77对小鼠肠道菌群的影响<br>　　选取10周龄WT和Nur77-/-C57BL/6公鼠各13只，屠宰后采集结肠食糜，研究Nur77对小鼠肠道菌群的影响。主要结果如下：<br>　　1.对小鼠肠道菌群组成的影响：WT和Nur77-/-小鼠结肠菌群α-多样性无差异，但反映β-多样性的Bray-Curtis距离差异显著(P<0.05)。与WT相比，Nur77-/-小鼠肠道菌群中Rikenella、Corynebacterium和Erysipelotrichaceae.Clostridium丰度减少，而Shigella、Allobaculum和Clostridiaceae.Clostridium富集，表明Nur77-/-小鼠结肠中抗炎菌群丰度减少，促炎菌群丰度增加。<br>　　2.小鼠肠道菌群组成和抗菌肽mRNA表达的相关性分析：结肠食糜中Clostridiaceae.Clostridium与空肠潘氏细胞来源的抗菌肽(Defa1、Defa4、Defa5、cryptdin-1、cryptdin-2、cryptdin-4和lyz-2)mRNA表达显著负相关(P<0.05)，但和结肠中PLA2和Defb2mRNA表达正相关(P<0.05)；Corynebacterium和Erysipelotrichaceae.Clostridium与结肠Defb2mRNA表达显著负相关(P<0.05)；Shigella与结肠Lyz-2、reg3b和reg3gmRNA表达显著负相关(P<0.05)，但和结肠中PLA2mRNA表达正相关(P<0.05)，提示Nur77可能通过影响抗菌肽的表达来调控肠道菌群。<br>　　3.对小鼠肠道菌群功能的影响：KEGG分析表明，与WT小鼠相比，Nur77-/-小鼠肠道菌群甜菜素和异黄酮生物合成功能减弱(P<0.05)，提示Nur77-/-小鼠肠道菌群抗炎和抗氧化功能可能减弱。<br>　　综上所述，本研究的主要结论是：<br>　　Nur77是维持肠道健康的关键因子，可以通过提高小鼠空肠潘氏细胞数量和肠上皮细胞抗菌肽基因的表达，以及调控肠道中抗炎和抗氧化相关菌的丰度，提高肠道对病原菌的抗感染性能。<br>