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摘要蜡梅科植物开花时间差异较大，其中，蜡梅延迟至冬天才能开花，这也使得蜡梅成为一种理想的冬季赏花木本植物，而且被广泛地运用到城乡园林建设中，但是，关于蜡梅在开花时间方面所具备的特殊性却鲜少见人研究。根据本实验室前期对蜡梅花发育通路基因鉴定的结果，发现在蜡梅中缺少了植物开花的负调控因子FLC基因，但是存在一个与FLC调控密切相关的FRI基因。因此，本课题将蜡梅CpFRI基因作为影响其开花时间的候选基因，试图通过进一步研究CpFRI基因的功能，初步分析这一基因在蜡梅开花过程中所起到的作用，主要的研究结果如下：<br>　　1．基于蜡梅品种H29基因组和转录组的基因数据库，共筛选出5个蜡梅FRI类似基因，本次研究选择将这5个基因作为蜡梅FRI的代表基因，它们构成了蜡梅FRIGIDA-LIKE基因家族成员，分别命名为CpFRI1、CpFRI2、CpFRI3、CpFRI4、CpFRI5。<br>　　2．对FRI基因进行进化分析，发现除拟南芥FRIGIDA-LIKE基因亚家族V成员AtFRL5以外，其它亚家族成员均与蜡梅FRI基因聚类到一起。CpFRI1和CpFRI3与拟南芥FRIGIDA-LIKE基因亚家族III成员AtFRL3聚类到一起，同源性分别为100%和83%；CpFRI2与拟南芥FRIGIDA-LIKE基因亚家族II成员AtFRL1/2聚类到一起，同源性为40%；CpFRI4与拟南芥FRIGIDA-LIKE基因亚家族I成员AtFRI聚类到一起，同源性为77%；CpFRI5与拟南芥FRIGIDA-LIKE基因亚家族IV成员AtFRL4a/4b聚类到一起，同源性为36%。<br>　　3．以蜡梅品种H29的cDNA为材料克隆出FRI基因，CpFRI1、CpFRI2、CpFRI3、CpFRI4、CpFRI5基因ORF全长分别为1626bp、1689bp、1683bp、1647bp、1632bp，并分别编码541、562、560、548、543个氨基酸，而且它们的FRIGIDA保守结构域长度基本相同，依次由287、277、287、288、288个氨基酸组成。<br>　　4．构建了CpFRI1、CpFRI2、CpFRI3、CpFRI4、CpFRI5基因pCAMBIA2300超表达载体，分别在模式植物烟草和拟南芥中异位表达，发现各转基因烟草和空载体烟草的开花时间之间未出现明显差异，而各转基因拟南芥和空载体拟南芥相比却明显晚花。由此可知，蜡梅FRIGIDA-LIKE基因家族成员的功能不仅高度相似，而且调控烟草和拟南芥的开花时间效果不同。推测这种不同可能与植物是否需要春化作用有关，蜡梅FRI基因晚花功能的实现需要目标植物对于春化作用的需求来加持，这样才能使FRI基因能够有效作用于FLC基因进而推迟植物的开花时间。<br>　　5．通过定量PCR对蜡梅不同组织部位和不同花发育阶段进行表达量分析，发现CpFRI1、CpFRI2、CpFRI3、CpFRI4、CpFRI5基因在3个不同器官中的表达量均在花中达到了最大值，说明蜡梅FRIGIDA-LIKE基因家族成员在调控植物开花方面具有重要的生物学意义。CpFRI1、CpFRI2、CpFRI3、CpFRI4、CpFRI5基因在3个花发育阶段的表达量均没有产生明显变化，该结果表明，随着蜡梅从花苞到盛开近3个月的过程中，经历的低温不会影响CpFRI基因的表达，这也间接地暗示蜡梅FRIGIDA-LIKE基因家族成员起到决定性作用的时期并不处于花发育阶段，而更有可能处于花发育阶段之前的成花诱导阶段。