换一批
换一批摘要癌症是目前威胁全人类生命健康的头号疾病，其疾病成因多样，调控机制复杂，给研究和治疗带来了巨大的挑战。RBM47是一种具有3个RNA识别结构域的RNA结合蛋白，它在癌细胞生长增殖、侵袭迁移等方面具有抑制作用。我们通过对细胞内过表达RBM47富集其互作蛋白的质谱数据进行分析，发现了类泛素蛋白修饰ISGylation的E3连接酶HERC5。利用siRNA分别特异性敲低HERC5和ISG15，我们发现RBM47蛋白二聚化减少，说明RBM47可能存在ISGylation修饰。通过构建ISGylation修饰系统，即在细胞内过表达ISGylation修饰相关蛋白，我们进一步证明了RBM47蛋白上可以发生ISGylation修饰，随后确定第329位赖氨酸为修饰位点，并且发现该位点的修饰发生促进RBM47形成蛋白二聚化。在找寻影响RBM47的ISGylation修饰发生的上游途径中，我们发现低氧环境可促进修饰发生。此外RBM47自身的多点磷酸化也促进修饰发生。我们通过酵母双杂交证明RBM47和YTHDF2存在蛋白互作，并且观察到RBM47第538位甘氨酸突变为精氨酸后不再与YTHDF2蛋白互作。我们在探索RBM47ISGylation修饰的功能时，利用ISG15敲低的siRNA实验联合细胞内RBM47免疫共沉淀实验，发现RBM47的ISGylation修饰会减弱RBM47与YTHDF2的蛋白互作。总的来说，本文是研究RBM47的ISG化发生机制及初步探索该修饰发生后的功能。
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