检索历史 清除

摘要目的：明确缺血性脑卒中患者血清及缺血性脑卒中小鼠模型脑组织中miR-122的表达水平，探讨miR-122对其靶基因Maf1的调控作用。<br>　　方法：收集10例患者发病后1天和7天的血液标本5毫升进行检测，并收集8例正常人的血液标本5毫升，进行分离血清，并进一步提取血清中的miR-122，再通过实时定量PCR技术（qRT-PCR）检测血清中miR-122的表达水平。将C57B/6（B6）小鼠随机分为4组，第1组为假手术组，第2组为缺血性脑卒中模型构建1天组，第3组为缺血性脑卒中模型构建3天组，第4组为缺血性脑卒中模型构建7天组。利用电凝法构建缺血性脑卒中模型，建模24小时后采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色方法检测缺血部位。运用qRT-PCR技术，对小鼠脑组织中miR-122在假手术组、缺血后1天、3天、7天表达水平进行检测；通过生物信息学数据库及基因预测软件（Target Scan7.2、miRWalk、MiRtaget2），进一步分析预测出miR-122对Maf1基因存在靶向关系；采用双荧光素酶报告基因测定系统验证miR-122的靶基因，miRNA和重组质粒转染HEK-293A细胞，结果用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的酶活性之比表示（F/R值）。通过运用qRT-PCR技术，采用两步法的反应条件，进一步检测小鼠大脑皮质组织中Maf1在假手术组、第1天、3天、7天表达量的变化。将miR-122对照（nc）、模拟物（mimic）、抑制物（inhibitor）于侧脑室注射24小时后构建MCAO模型，运用qRT-PCR技术，对小鼠脑组织中miR-122，Maf1的表达水平分别进行检测。<br>　　结果：（1）脑卒中患者组第1天、第7天血清中的miR-122的表达高于正常人组；（2）B6小鼠缺血性脑卒中模型组大脑皮质组织miR-122的表达相对于假手术组，在第1、3天均上升，第7天下降；（3）基因预测软件显示miR-122可靶向结合于Maf1基因3'非编码区（3'UTR），并且这一预测结果同时满足于人、大鼠、小鼠三个种属；（4）共转染Maf1-WT-3'UTR+miR-122组HEK293A细胞荧光素酶活性较miR-NC组显著降低；共转染Maf1-MUT-3'UTR+miR-122组HEK293A细胞荧光素酶活性较miR-NC组无显著差异；（5）B6小鼠缺血性脑卒中模型组大脑皮质组织Maf1的表达相对于假手术组，在第1、3、7天均显著下降；（6）侧脑室注射miR-122mimic后，相对于阴性对照，Maf1的表达降低；侧脑室注射miR-122inhibitor后，Maf1的表达增多。<br>　　结论：在缺血性脑卒中的发生发展过程中，miR-122的表达升高上调，可能通过调控基因Maf1，来改善缺血性脑卒中的结局。促进对缺血性脑卒中发生和发展的更进一步认识，并且为临床治疗提供新的思路，开辟新的治疗途径。