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缺血性脑卒中miR-122的表达及对Maf1调控的相关性研究

摘要目的:明确缺血性脑卒中患者血清及缺血性脑卒中小鼠模型脑组织中miR-122的表达水平,探讨miR-122对其靶基因Maf1的调控作用。<br>  方法:收集10例患者发病后1天和7天的血液标本5毫升进行检测,并收集8例正常人的血液标本5毫升,进行分离血清,并进一步提取血清中的miR-122,再通过实时定量PCR技术(qRT-PCR)检测血清中miR-122的表达水平。将C57B/6(B6)小鼠随机分为4组,第1组为假手术组,第2组为缺血性脑卒中模型构建1天组,第3组为缺血性脑卒中模型构建3天组,第4组为缺血性脑卒中模型构建7天组。利用电凝法构建缺血性脑卒中模型,建模24小时后采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色方法检测缺血部位。运用qRT-PCR技术,对小鼠脑组织中miR-122在假手术组、缺血后1天、3天、7天表达水平进行检测;通过生物信息学数据库及基因预测软件(Target Scan7.2、miRWalk、MiRtaget2),进一步分析预测出miR-122对Maf1基因存在靶向关系;采用双荧光素酶报告基因测定系统验证miR-122的靶基因,miRNA和重组质粒转染HEK-293A细胞,结果用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的酶活性之比表示(F/R值)。通过运用qRT-PCR技术,采用两步法的反应条件,进一步检测小鼠大脑皮质组织中Maf1在假手术组、第1天、3天、7天表达量的变化。将miR-122对照(nc)、模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)于侧脑室注射24小时后构建MCAO模型,运用qRT-PCR技术,对小鼠脑组织中miR-122,Maf1的表达水平分别进行检测。<br>  结果:(1)脑卒中患者组第1天、第7天血清中的miR-122的表达高于正常人组;(2)B6小鼠缺血性脑卒中模型组大脑皮质组织miR-122的表达相对于假手术组,在第1、3天均上升,第7天下降;(3)基因预测软件显示miR-122可靶向结合于Maf1基因3'非编码区(3'UTR),并且这一预测结果同时满足于人、大鼠、小鼠三个种属;(4)共转染Maf1-WT-3'UTR+miR-122组HEK293A细胞荧光素酶活性较miR-NC组显著降低;共转染Maf1-MUT-3'UTR+miR-122组HEK293A细胞荧光素酶活性较miR-NC组无显著差异;(5)B6小鼠缺血性脑卒中模型组大脑皮质组织Maf1的表达相对于假手术组,在第1、3、7天均显著下降;(6)侧脑室注射miR-122mimic后,相对于阴性对照,Maf1的表达降低;侧脑室注射miR-122inhibitor后,Maf1的表达增多。<br>  结论:在缺血性脑卒中的发生发展过程中,miR-122的表达升高上调,可能通过调控基因Maf1,来改善缺血性脑卒中的结局。促进对缺血性脑卒中发生和发展的更进一步认识,并且为临床治疗提供新的思路,开辟新的治疗途径。

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