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miR-125b-5p在泡型包虫病患者中的验证、分子调控和靶基因预测

摘要目的:1)检测hsa-miR-125b-5p在泡型包虫病患者的血清及肝脏病灶边缘带组织中的表达;2)体外慢病毒转染Huh7细胞使hsa-miR-125b-5p过表达,检测细胞增殖活力的改变;3)初步预测和分析hsa-miR-125b-5p的靶基因,为进一步寻找泡型包虫病早期诊断的分子标志物提供一定的理论基础。<br>  方法:1)利用荧光定量PCR检测22份泡型肝包虫病患者及22份健康对照血清中hsa-miR-125b-5p的相对表达量;2)利用荧光定量PCR检测16个泡型包虫病患者肝病灶的边缘带与远离病灶的肝组织中hsa-miR-125b-5p的相对表达量;3)构建慢病毒载体转染Huh7细胞,使hsa-miR-125b-5p过表达,用CCK-8试剂盒处理转染后的Huh7细胞,然后用酶标仪检测450nm波长处的OD值,统计分析得出其增殖活力是否发生变化;4)用miRDB、starBase、miRwalk和miRTarbase四个数据库资源预测hsa-miR-125b-5p可能的靶基因,并进行整合。然后利用Enrichr数据库、KEGG数据库和STRING数据库进行GO分析、通路分析和构建靶蛋白的PPI网络(蛋白质-蛋白质相互作用),通过数据库分析预测hsa-miR-125b-5p与泡型包虫病的关联性。<br>  结果:1)hsa-miR-125b-5p在泡型包虫病患者血清中的表达明显上调(P<0.0001);2)hsa-miR-125b-5p在泡型包虫病患者病灶边缘带组织中的表达明显上调(P<0.0001);3)hsa-miR-125b-5p的表达量增高后,Huh7细胞增殖活力表现为减弱;4)GO分析显示,hsa-miR-125b-5p的靶基因在生物过程中(P<0.05)显著富集于细胞凋亡过程的调节、细胞增殖的调控等,在分子功能中(P<0.05)显著富集于转录调控区DNA结合、MAP激酶活性调节等,在细胞成分(P<0.05)中显著富集于染色质RNA、核糖体和线粒体相关功能调控等。KEGG通路分析预测出与肝脏纤维病变密切关联的信号通路:肝细胞癌通路、MAPK通路;蛋白相互作用网分析确定了8个在蛋白相互作用中处于重要位置的靶基因:TP53、STAT3、AKT1、JUN、JAK2、MAPK14、SMAD4、EGFR。<br>  结论:1)相对于对照组,hsa-miR-125b-5p在泡型包虫病患者血清中及肝病灶边缘带组织中的表达具有差异性,且都表现为上调;2)细胞水平初步验证hsa-miR-125b-5p的过表达可以对Huh7细胞的增殖活力产生负性影响;3)初步预测分析了hsa-miR-125b-5p的靶基因功能,为进一步寻找泡型包虫病早期诊断的分子标志物提供了一定的基础。

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导师 曹得萍
学位信息:
青海大学 生物学 病原生物学(硕士) 2020年
分类号 R532.320.4
发布时间 2020-12-30
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