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摘要目的：<br>　　糖代谢在肾癌细胞中参与多种生命活动，与肿瘤细胞的免疫逃逸有关，但其机制尚未明确。本研究通过模拟癌细胞低糖微环境降低糖酵解水平，探索癌细胞糖代谢重编程与免疫检查点PD-L1的关系，并探讨其相关分子作用机制对免疫逃逸的影响。<br>　　方法：<br>　　根据不同的干预条件来对786-O和OS-RC-2细胞进行分组，以干预培养不同的糖浓度梯度将其分为对照组(2000mg/L)、低糖组（786-O：500mg/L，OS-RC-2：125mg/L）；通过qRT-PCR和Western Blot（WB）来测定低糖环境中免疫逃逸相关分子PD-L1在mRNA和蛋白水平的表达。通过WB法来测定糖酵解相关分子HIF-1α，PFKFB3，LDHA以及EGFR/ERK/c-Jun通路蛋白的表达情况。分别应用HIF-1α抑制剂（PX-478）和PFKFB3的抑制剂（PFK-015）后WB方法检测糖酵解相关蛋白HIF-1α，PFKFB3，LDHA的上下游关系以及与PD-L1的关系，同时测乳酸（LD）水平对比糖酵解水平变化。通过加入EGFR抑制剂（Gefitinib）、EGFR激活剂（EGF）、ERK抑制剂（U0126）、c-Jun抑制剂（SP600125），后用WB方法检测EGFR、ERK、c-Jun、PD-L1，确定相关分子上下游关系及对PD-L1表达的影响。共培养CD3淋巴细胞和糖酵解抑制剂干预后的肾癌细胞后用IFN-γ试剂盒检测IFN-γ水平，确定糖酵解对PD-L1介导的免疫逃逸的影响；应用PD-L1的小干扰RNA（SiRNA）敲低PD-L1表达后WB检测糖酵解关键酶的表达，验证PD-L1对糖酵解代谢是否有影响。通过MTT法和活细胞工作站分别检测不同组别786-O和OS-RC-2细胞增殖能力。<br>　　结果：<br>　　1.RT-qPCR和WB结果显示与正常糖浓度比较，两种细胞的低糖干预组PD-L1表达均上调；WB结果显示低糖组糖酵相关酶HIF-1α，PFKFB3和LDHA均上调，且糖浓度越低，其表达水平越高。<br>　　2.加入HIF-1α抑制剂（PX-478）后，HIF-1α、PFKFB3、LDHA下调，LD下调，PD-L1上调；加入PFKFB3（U0126）抑制剂后，PFKFB3、LDHA下调，PD-L1上调；证明HIF-1α是调控PFKFB3和LDHA的上游分子，PFKFB3是调控LDHA的上游分子，LD水平降低提示糖酵解水平下降。<br>　　3.加入EGFR抑制剂（Gefitinib）后p-EGFR、p-ERK、p-c-Jun、PD-L1下调，加入EGFR激动剂（EGF）后p-EGFR、p-ERK、p-c-Jun、PD-L1上调；加入ERK抑制剂（U0126）后，p-ERK、p-c-Jun、PD-L1下调，加入c-Jun抑制剂（SP600125）后，p-c-Jun、PD-L1下调，确定EGFR/ERK/c-Jun通路调节PD-L1。<br>　　4.通过IFN-γ检测发现加入HIF-1α抑制剂组和PFKFB3抑制剂组，IFN-γ水平低，证明抑制糖酵解使PD-L1上调导致CD3淋巴细胞分泌IFN-γ降低。<br>　　5.通过SiRNA敲低PD-L1的表达后，WB检测发现，PFKFB3下调，HIF-1α无明显变化，表明PD-L1通过PFKFB3调节糖酵解。<br>　　6.活细胞工作站和MTT法均表明低糖或抑制糖酵解关键酶导致细胞增殖受到抑制。<br>　　结论：<br>　　本研究阐明了肾癌细胞系786-O和OS-RC-2进行糖酵解对PD-L1表达的影响及机制，在一定范围内细胞微环境中葡萄糖浓度越低，肿瘤细胞PD-L1表达水平越高；环境低糖或抑制糖酵解关键酶都会导致糖酵解水平降低，PD-L1上调，其机制通过激活EGFR/ERK/c-Jun通路上调PD-L1，导致淋巴细胞表达IFN-γ能力降低，进而发生免疫逃逸；同时PD-L1又通过PFKFB3反馈性调节糖酵解，避免糖酵解产能过渡；抑制糖酵解水平对细胞增殖有明显抑制作用。