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摘要细胞程序性死亡（Programmed Cell Death，PCD）是生物体为维持内环境稳定而产生的一种特殊的细胞死亡机制，是基本的生物学现象。PCD过程由多种基因控制，此类基因在多种动植物之间都非常保守。抗细胞凋亡基因（Defender against Apoptotic Death,DAD）就是其中之一。该基因编码寡糖基转移酶（OST）复合物中的一个亚基，是内质网中催化N-糖基化的主要核心成分，负向调控PCD过程的进行，在植物正常发育和抵御各类胁迫中发挥作用。本课题组前期的研究发现，在异源四倍体陆地棉（Gossypium hirsutum L.，基因组为AADD）中，DAD基因由于多倍化和选择性剪接等原因共产生3个转录本，分别命名为Dt1，Dt2和At，这3个转录本间具有明显表达分化。为了进一步揭示这3个转录本在陆地棉内的并存方式和抗凋亡机制，本研究从蛋白互作的角度，对陆地棉DAD基因3个转录本编码蛋白的互作谱进行了初步筛查，主要结果如下：<br>　　1、成功构建了3个转录本的诱饵载体<br>　　以异源四倍体陆地棉叶片组织的cDNA为模板，利用特异性引物与分子克隆技术得到了Dt1、Dt2和At转录本的编码区全长序列；分别构建了用于酵母双杂交的诱饵载体Dt1-pGBKT7、Dt2-pGBKT7和At-pGBKT7；诱饵载体转化Y2H Gold菌株后酵母生长结果表明这3个转录本编码蛋白均对酵母细胞无毒性且无自我激活活性。<br>　　2、成功构建了酵母双杂交cDNA表达文库<br>　　以陆地棉的叶片、花和棉纤维组织为样品，构建了一个用于蛋白互作网络筛选的高质量cDNA表达文库。初级文库库容量大于2.6×106cfu，平均插入片段长度大于1.0kb，百万级扩增文库质粒浓度为1.0mg/mL。<br>　　3、初筛3个转录本编码蛋白的互作蛋白<br>　　诱饵载体Dt1-pGBKT7、Dt2-pGBKT7和At-pGBKT7分别与cDNA表达文库共转化Y2H Gold菌株。共转化效率在7.15×104-1.25×105cfu/μg之间。通过酵母菌落PCR和测序鉴定，初步筛选到与Dt1互作的蛋白5个，与Dt2互作的蛋白4个，与At互作的蛋白3个。筛选到的蛋白中有5个蛋白分别参与植物体内不同组织关于PCD调控的机制，另外发现DUF538family protein能够与Dt1和Dt2互作。而Dt1、Dt2与At转录本编码蛋白之间目前还未筛选到共享互作蛋白。这暗示陆地棉DAD基因的3个转录本可能参与不同的代谢途径并出现功能分化。