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摘要目的：<br>　　本研究拟通过对2型糖尿病骨髓间充质干细胞（BMSCs）中BMAL1与p53的表达情况进行检测，探究在2型糖尿病的环境中，BMAL1通过p53调控BMSCs成骨分化的具体机制，为防治2型糖尿病骨缺损和BMSCs在临床中的应用提供实验基础和理论依据。<br>　　方法：<br>　　（1）应用GK大鼠来建立2型糖尿病的大鼠模型，并进行筛选，Wistar大鼠设置为对照组。分离并体外培养GK大鼠BMSCs和Wistar大鼠BMSCs。通过流式细胞仪检测及茜素红和油红O染色对两组BMSCs细胞表面标志物和多向分化能力进行检测，继而对两组细胞进行鉴定并观察两组间差异。（2）应用慢病毒感染技术在GKBMSCs中过表达BMAL1，分别对Wistar BMSCs、GK BMSCs和GK-BMAL1BMSCs进行成骨诱导7天，通过Western Blot、qRT-PCR和碱性磷酸酶染色对各组细胞的成骨分化情况进行检测。同时，检测各组BMSCs的增殖和凋亡情况，以期明确BMSCs的增殖与其成骨分化之间的关系。（3）通过qRT-PCR、Western Blot和免疫荧光检测3组BMSCs中p53和p21的表达水平，探究2型糖尿病中BMAL1与p53的相互关系。使用p53抑制剂pifithrin-α（PFT-α）降低GK BMSCs和过表达BMAL1的GK BMSCs中的p53表达，针对各组BMSCs中成骨标志物的表达及Alp活性进行检测和分析。为排除PFT-α的潜在非特异性效应，本课题应用基因沉默技术（p53shRNA）下调GK BMSCs和过表达BMAL1的GK BMSCs中p53的水平，重复上述实验内容。<br>　　结果：<br>　　1.在本研究中，2型糖尿病GK大鼠模型的构建成功率是80%。<br>　　2.Wistar BMSCs和GK BMSCs的细胞表面标志物表达无显著差异，并且二者均具有多向分化能力，但GK BMSCs的成骨分化能力较Wistar BMSCs低。<br>　　3.成骨诱导7天后，GK BMSCs中Runx2、Alp、Ocn和Osx的水平和Alp活性显著低于Wistar组。而过表达BMAL1后GK BMSCs中成骨标志物表达水平及Alp活性明显升高，甚至高于Wistar组。Ocn的表达在过表达BMAL1的GK BMSCs和GK BMSCs间无显著性差异。<br>　　4.GK BMSCs的增殖能力较Wistar BMSCs明显降低，且更容易被诱导凋亡。GK BMSCs的成骨分化能力随着其增殖代数的增加而呈现出下降趋势，第6代BMSCs的Alp活性较同组第4代细胞明显降低。过表达BMAL1可明显改善上述情况。<br>　　5.相对于Wistar组，BMAL1在GK BMSCs中的表达水平明显降低，而p53和p21的水平则表现为显著升高。过表达BMAL1可使GK BMSCs中p53和p21的表达水平降低，甚至低于Wistar BMSCs。<br>　　6.应用PFT-α或p53shRNA后，GK BMSCs和过表达BMAL1的GKBMSCs中p53表达被显著抑制。经PFT-α或p53shRNA处理的GK BMSCs和过表达BMAL1的GK BMSCs在成骨诱导7天后，Runx2、Osx和Alp水平和Alp活性均比各组未经PFT-α或shRNA处理的BMSCs显著升高，经PFT-α或p53shRNA处理的过表达BMAL1的GK BMSCs的成骨分化能力在各组中最高，甚至高于Wistar BMSCs。但BMAL1的表达水平在PFT-α或p53shRNA处理前后无显著变化。<br>　　结论：<br>　　1.BMSCs的增殖和成骨分化能力在2型糖尿病中显著下降。<br>　　2.在2型糖尿病环境中，BMAL1参与了对p53信号通路的调控。<br>　　3.在2型糖尿病的BMSCs中，BMAL1下调激活p53，使其表达增高，进而对BMSCs的成骨分化产生抑制作用。<br>　　4.在2型糖尿病中，过表达BMSCs中的BMAL1能够下调p53，这有助于恢复BMSCs受损的增殖和成骨分化潜能。<br>　　5.BMAL1可能成为骨组织工程中2型糖尿病骨缺损修复治疗的新靶点。