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摘要目的：<br>　　人类乳头瘤病毒（HPV）感染和病毒蛋白表达可引起多种表观遗传学改变，从而导致恶性肿瘤的发生。近期研究发现大量组蛋白甲基化修饰物在调节肿瘤进展中起重要作用。本文旨在研究HPV16E7诱导的KDM2A上调在hrHPV感染致癌进展中的作用，为HPV感染相关疾病的诊断、治疗及预后判断提供有效的理论依据。<br>　　方法：<br>　　1.在CaSki细胞中转染siRNA-E7或相应对照后，运用实时定量荧光PCR技术检测细胞中组蛋白去甲基化酶mRNA水平或组蛋白甲基化酶mRNA水平。<br>　　2.在SiHa细胞中转染siRNA-E7或相应对照后，运用实时定量荧光PCR技术检测KDM2A mRNA水平；C33A细胞中转染pcDNA-E7或相应对照，使用实时定量荧光PCR技术测定KDM2A mRNA水平。<br>　　3.通过实时定量荧光PCR技术检测HPV16阳性的宫颈肿瘤组织和邻近正常组织中KDM2A的表达水平。<br>　　4.用Kaplan-Meier法评估KDM2A表达水平与宫颈肿瘤患者总体生存率之间的关系。<br>　　5.在CaSki和SiHa细胞中转染pcDNA-KDM2A、siRNA-KDM2A或相应对照后，用细胞计数盒-8检测CaSki和SiHa细胞增殖情况。<br>　　6.在CaSki和SiHa细胞中转染pcDNA-KDM2A、siRNA-KDM2A或相应对照后，运用transwell试验检测CaSki和SiHa细胞的侵袭能力。<br>　　7.将稳定表达KDM2A的SiHa细胞及相应对照细胞分别注入到BALB/c裸鼠双侧腹部，对皮下肿瘤体积进行监测；裸鼠尾静脉分别注射荧光素标记的稳定表达KDM2A的SiHa细胞及相应对照细胞，在注射后10周检测生物发光信号，使用IVIS LuminaⅡ系统对肺转移进行监测和量化。将来自不同实验组的代表性肺组织样品进行HE染色。<br>　　8.通过PubMed筛选出与宫颈癌发生和进展相关的miRNAs，在CaSki细胞中转染siRNA-KDM2A后运用实时定量荧光PCR技术测定这些miRNAs的表达，筛选出相关性最高的5种miRNAs，用CHIP技术和实时定量荧光PCR技术测定这5种miRNAs的启动子上KDM2A的募集情况，发现KDM2A与miR-132相互作用。<br>　　9.在CaSki、SiHa和C33A细胞中转染pcDNA-KDM2A、siRNA-KDM2A或相应对照后，运用实时定量荧光PCR技术检测miR-132表达水平。<br>　　10.实时定量荧光PCR技术检测HPV16阳性宫颈肿瘤组织和癌旁组织中的miR-132表达水平。运用Spearman相关性分析方法分析宫颈癌组织中KDM2A水平与miR-132水平之间的关系。<br>　　11.在CaSki和SiHa细胞中转染pcDNA-KDM2A、pcDNA-KDM2A+miR-132或相应对照后，用细胞计数盒-8检测CaSki和SiHa细胞增殖情况。<br>　　12.在CaSki和SiHa细胞中转染pcDNA-KDM2A、pcDNA-KDM2A+miR-132或相应对照后，用transwell试验检测CaSki和SiHa细胞的侵袭能力。<br>　　13.将稳定表达KDM2A或KDM2A+miR-132的CaSki细胞或SiHa细胞及相应对照细胞分别注入BALB/c裸鼠背部中段，对肿瘤体积及肺转移情况进行监测。<br>　　结果：<br>　　1.KDM2A表达受HPV16E7正调控，且在hrHPV+宫颈癌细胞中经常升高；<br>　　2.KDM2A在体外和体内促进hrHPV+宫颈癌细胞的生长和侵袭；<br>　　3.KDM2A通过去除H3K36中的单甲基和二甲基标记直接抑制miR-132的表达；<br>　　4.KDM2A以miR-132依赖性方式促进肿瘤生长和转移；<br>　　结论：<br>　　HPV16E7诱导的KDM2A上调通过抑制miR-132的表达来促进hrHPV所致宫颈癌的恶性进展。