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摘要目的：<br>　　利用噬菌体展示技术体内筛选法获得人髓样乳腺癌细胞Bcap-37特异性结合肽，为乳腺癌早期诊断提供分子靶向探针。<br>　　方法：<br>　　制备人髓样乳腺癌Bcap-37细胞荷瘤裸鼠模型，采用噬菌体环七肽库进行3轮体内筛选。免疫组化检测筛选过程中噬菌体在肿瘤及正常组织中的分布情况。酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定单克隆噬菌体对Bcap-37细胞的亲和力。提取阳性单克隆噬菌体DNA并测序，选取重复率高的序列合成多肽，制备光学分子探针。MTT法检测多肽及光学分子探针对Bcap-37细胞的毒性。用荧光倒置显微镜术和流式细胞术鉴定光学分子探针与Bcap-37细胞的特异性。最后在荷瘤裸鼠模型体内验证其对乳腺移植瘤的特异性和靶向性。<br>　　结果：<br>　　1经过三轮体内筛选，获得了特异性结合Bcap-37细胞异体移植瘤的噬菌体。随着每轮筛选，噬菌体的回收率不断提高，第三轮的回收率是第一轮的107.2倍。<br>　　2免疫组化结果显示，随着筛选轮数的增加，肿瘤组织中结合的噬菌体数依次增加，肿瘤组织中噬菌体结合数明显高于正常组织。肿瘤组织切片扫描图像的吸光度(A)值均较正常组织高，差异均有统计学意义(均P＜0.05)。<br>　　3经ELISA鉴定，随机选择的50个噬菌体克隆中有22个是阳性单克隆噬菌体(亲和力≥2)。<br>　　4阳性单克隆噬菌体DNA序列分析结果显示，重复出现两次及以上的氨基酸序列有4条，CSPLNTRFC的重复率最高，而且与数据库中已知的氨基酸序列均无同源性，被命名为BCSP1。<br>　　5化学合成多肽(BCSP1)、FITC标记的多肽(FITC-BCSP1)及FITC标记的对照肽(FITC-svBCSP1)，通过质谱鉴定，所合成肽的纯度≥98%。<br>　　6MTT结果显示：导向肽BCSP1、光学分子探针FITC-BCSP1及FITC-svBCSP1在不同浓度下对Bcap-37细胞的增殖及活性基本无影响。<br>　　7光学分子探针FITC-BCSP1和FITC-svBCSP1分别与Bcap-37细胞孵育后，在荧光倒置显微镜下观察到，FITC-BCSP1与Bcap-37细胞特异性结合，而FITC-svBCSP1与Bcap-37细胞基本不结合。<br>　　8流式细胞术结果：根据Bcap-37细胞空白组检测结果设置阴性阈值为0.18%。经FITC-BCSP1孵育的细胞中，Bcap-37细胞的阳性细胞百分比为94.53±2.26%<br>　　明显高于其它细胞(P＜0.05),表明FITC-BCSP1能与Bcap-37细胞特异性结合。<br>　　9将200μL浓度为280μmol/L的光学分子探针(FITC-BCSP1)从尾静脉注入Bcap-37细胞荷瘤裸鼠模型体内2.5h后，FITC-BCSP1能明显富集在乳腺移植瘤组织，活体肿瘤区的荧光信号强度达到最强(灰度值78.68)。离体肿瘤组织可检测到较强荧光信号(灰度值80.43)，正常组织除胆囊外几乎看不到荧光信号。<br>　　结论：<br>　　本实验通过噬菌体展示体内筛选获得了能够特异性结合人髓样乳腺癌细胞Bcap-37的多肽BCSP1(CSPLNTRFC)，并在体外和体内初步验证了其特异性及靶向性，为乳腺癌早期诊断的研究奠定了基础。