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摘要目的：<br>　　采用孟德尔随机化方法，选择代表维生素D(Vitamin D，VD)水平/缺乏的遗传变异构建遗传风险评分(Geneticriskscore，GRS)，以此作为工具变量，进行VD水平/缺乏与原发性肝癌(简称“肝癌”)发生的因果关系分析。<br>　　方法：<br>　　1、采用1∶1频数匹配的病例对照研究方法。病例组为南方医科大学顺德医院收治的30~79岁新发肝癌病例，共1068例；1068例健康对照以及构建工具变量的2000例健康个体均来自于顺德健康筛查人群。<br>　　2、采用酶联免疫法检测血清25(OH)D浓度。选择GWAS报道且在亚洲人群中经验证以及课题组前期验证的共9个VD关联变异作为目标遗传变异(rs12785878、rs1790349、rs4588、rs7041、rs1155563、rs10741657、rs12794714、rs6013897和rs2209314)，应用TaqMan荧光定量PCR技术进行基因分型。<br>　　3、按照血清25(OH)D＜50nmol/L判断为VD缺乏的标准，将VD水平进行分类(VD缺乏/不缺乏)。为排除季节因素(日照时数)影响VD水平所致的混杂偏倚，仅纳入采样时间相近(1~5月)的427例病例和427例对照，应用多因素Logistic回归模型评价限制采样时间前后的VD水平/缺乏与肝癌发生风险的观察效应。<br>　　4、在2000例健康个体中进一步确认目标遗传变异与VD水平的关联性，计算未加权GRS、未加权核心GRS、加权GRS和加权核心GRS，以此作为VD水平的工具变量。VD缺乏的工具变量构建类似。采用广义线性回归模型和Logistic回归模型分别估计GRS与VD水平和VD缺乏的关联效应。<br>　　5、考虑到遗传变异分布不受季节因素影响，在1068例病例和1068例对照中，基于连续性GRS，通过多因素Logistic回归模型分析其与肝癌发生风险的关联效应；基于四分位数法，观察不同GRS等级与肝癌发生风险的非线性因果联系。通过弱工具变量检验和多效性筛查，探讨工具变量使用的条件满足与否，剔除多效性遗传变异进一步优化GRS构建新工具变量，并在限制研究对象采样时间的基础上，以同样统计策略分析新工具变量与肝癌发生风险的因果关系。<br>　　结果：<br>　　1、在427例病例和427例对照中(采样时间均为1~5月)，经多因素模型调整，VD水平每降低1nmol/L，肝癌发生风险增高1%(OR=1.01，95%CI=1.00~1.03)。VD缺乏增加76%的肝癌发生风险(OR=1.76，95%CI=1.16~2.65)。如未限制研究对象的采样时间，在1068例病例和1068例对照进行分析，VD与肝癌发生风险之间无统计学关联(VD水平：OR=1.11，95%CI=0.86~1.43；VD缺乏：OR=0.99，95%CI=0.99~1.00)。<br>　　2、在健康个体中进行目标遗传变异的进一步验证，结果表明：rs12785878、rs1790349、rs4588、rs7041、rs1155563、rs10741657和rs12794714与VD水平有统计学关联(PFDR均＜0.05)。另外，rs4588、rs7041、rs1155563、rs10741657和rs12794714与VD缺乏风险之间存在统计学关联(PFDR均＜0.05)。因此，将上述遗传变异用于构建核心GRS。VD水平的未加权GRS、未加权核心GRS、加权GRS和加权核心GRS的F统计量分别为87.29、87.30、124.23和120.32。类似，VD缺乏的GRS的F统计量也均大于10。所有GRS的统计效能均为100%，符合工具变量的关联性条件。<br>　　3、孟德尔随机化分析结果显示，无论是否加权，VD水平的GRS(未加权：P=0.534，加权：P=0.201)和VD缺乏的GRS(未加权：P=0.993，加权：P=0.271)均与肝癌发生风险无统计学关联。即便是仅保留阳性关联遗传变异，VD水平的核心GRS(未加权核心：P=0.710，加权核心：P=0.265)和VD缺乏的核心GRS(未加权核心：P=0.307，加权核心：P=0.083)也表现为无统计学关联。不同遗传风险等级也未能影响肝癌的发生风险(P均＞0.05)。此外，无论何种遗传风险评分，均未表现出与常见混杂因素有统计学联系(P均＞0.05)，符合工具变量的排他性条件。<br>　　4、在敏感性分析中，剔除可能的多效性遗传变异(rs12785878、rs1790349、rs7041、rs12794714和rs6013897)后重新计算GRS，该GRS与肝癌发生风险仍无统计学关联。进一步在采样时间相近的病例和对照中进行分析，GRS仍与肝癌发生无统计学关联。<br>　　结论：<br>　　本研究的孟德尔随机化分析尚不支持VD水平/缺乏与肝癌发生之间存在因果关联，而在病例对照研究中所发现的VD水平/缺乏与肝癌的关联性可能由于混杂偏倚和反向因果关联所导致，仍有待更多研究来验证本研究结果。