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摘要目的<br>　　探讨正己烷毒作用对雌性大鼠Nrf2信号通路、性激素水平和雌激素受体的影响，及枸杞多糖(LBP)对正己烷的干预作用，深入揭示正己烷的生殖毒理学机制以及枸杞多糖的生殖保护作用。<br>　　方法<br>　　选用48只SD雌性大鼠，按体重随机分为8组，每组6只，分别为：对照(生理盐水)组，低、中、高剂量正己烷(675、1350、2700 mg/kg)单独作用组，LBP(50 mg/kg)单独作用组，LBP(50 mg/kg)+低、中、高剂量正己烷(675、1350、2700 mg/kg)联合作用组。实验第1天对正己烷单独作用组和联合作用组进行腹腔注射正己烷单次染毒，对照组及LBP单独作用组腹腔注射生理盐水，第2～4天给对照组和正己烷单独作用组灌胃生理盐水，LBP单独作用组和联合作用组灌胃LBP，均1次/天，持续3天，第5天处死动物，解剖取血清和卵巢。采取羟胺法、酶促反应法、硫代巴比妥酸法分别检测超氧化物岐化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量；酶联免疫法分别检测雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和孕激素(PROG)水平；Real-timePCR检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)和G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1)的mRNA水平，Westernblot检测Nrf2、ERα、ERβ和GPER1的蛋白表达水平。<br>　　结果<br>　　(1)正己烷单独作用和LBP与正己烷联合作用对大鼠氧化应激水平的影响：大鼠血清中，各剂量正己烷单独作用组SOD活性显著下降(P＜0.05)，中、高剂量正己烷单独作用组GSH-Px活性显著下降(P＜0.05)，MDA含量显著上升(P＜0.05)；卵巢中，各剂量正己烷单独作用组GSH-Px活性显著下降(P＜0.05)，中、高剂量正己烷单独作用组SOD活性显著下降(P＜0.05)，高剂量正己烷单独作用组MDA含量显著上升(P＜0.05)；而且血清中GSH-Px活性下降和MDA含量升高更显著，氧化应激更严重。<br>　　LBP处理后，与未加LBP同剂量正己烷单独作用组相比，血清中，LBP+中剂量正己烷联合作用组GSH-Px活性显著升高(P＜0.05)，LBP+高剂量正己烷联合作用组SOD和GSH-Px活性显著升高(P＜0.05)。卵巢中，LBP+高剂量正己烷联合作用组SOD活性显著升高(P＜0.05)。LBP单独作用组中，血清和卵巢中SOD、GSH-Px活性和MDA含量无显著变化。<br>　　(2)正己烷单独作用和LBP与正己烷联合作用对大鼠Nrf2信号通路的影响：中、高剂量正己烷单独作用组卵巢Nrf2基因和蛋白表达均显著上调(P＜0.05)，下游Ⅱ相解毒酶HO-1、NQO1、GCLC基因也显著上调(P＜0.05)。LBP处理后，与未加LBP同剂量正己烷单独作用组相比，LBP+中、高剂量正己烷联合作用组卵巢Nrf2基因和蛋白表达水平均显著下降(P＜0.05)，且HO-1、NQO1、GCLC基因表达水平也均显著下降(P＜0.05)，而LBP单独作用组卵巢Nrf2蛋白和HO-1、NQO1、GCLC基因均显著上调(P＜0.05)。正己烷单独作用组和LBP+正己烷联合作用组中，HO-1、NQO1、GCLC基因转录水平与Nrf2转录因子表达水平间均具有高度相关性(P＜0.05)。<br>　　(3)正己烷单独作用和LBP与正己烷联合作用对大鼠性激素水平的影响：血清FSH、E2、PROG均呈现先上升后下降的趋势，在高剂量正己烷单独作用组下降，而LH则呈现先下降后上升的趋势，在中剂量正己烷单独作用组下降，差异无统计学意义(P>0.05)。FSH、E2和PROG的水平与正己烷剂量间存在相关性，随染毒剂量升高，呈先上升后下降趋势，在高剂量条件下水平最低(从对照组至中剂量组间：E2和PROG的相关系数r分别为：0.376和0.407，P＜0.05；从中剂量组到高剂量组间：FSH和PROG的相关系数r分别为：-0.484和-0.484，P＜0.05)。LBP处理后，与未加LBP同剂量正己烷单独作用组相比，LBP+中剂量正己烷联合作用组LH表达上调，LBP+高剂量正己烷联合作用组FSH、PROG表达上调，而LBP单独作用组LH表达下降。<br>　　(4)正己烷单独作用和LBP与正己烷联合作用对大鼠雌激素受体的影响：中、高剂量正己烷单独作用组卵巢ERα基因和蛋白、GPER1蛋白表达显著上调，ERβ基因和蛋白、GPER1基因表达显著下调(P＜0.05)。LBP处理后，与未加LBP同剂量正己烷单独作用组相比，LBP+低剂量正己烷联合作用组卵巢ERβ和GPER1蛋白表达显著下调(P＜0.05)，LBP+中剂量正己烷联合作用组卵巢ERα蛋白表达显著上调(P＜0.05)，LBP+高剂量正己烷联合作用组卵巢GPER1基因和蛋白表达显著下调(P＜0.05)，LBP单独作用组卵巢ERα、GPER1基因和蛋白表达显著上调(P＜0.05)，而卵巢ERβ蛋白表达显著下调(P＜0.05)。<br>　　相关性分析显示，正己烷单独作用下，Nrf2蛋白表达与ERα、GPER1蛋白表达呈正相关关系(P＜0.05)，而与ERβ蛋白表达呈负相关关系(P＜0.05)；LBP+正己烷联合作用下，Nrf2蛋白表达与GPER1蛋白的表达水平呈正相关关系(P＜0.05)。<br>　　结论<br>　　(1)一定剂量条件下(1350、2700 mg/kg)，正己烷可引起雌性大鼠血液系统和卵巢发生氧化应激，诱导Nrf2转录因子活化，上调下游Ⅱ相解毒酶的转录，发挥抗氧化应激作用。其中HO-1、NQO1、GCLC基因转录与Nrf2转录因子表达具有高度相关性。LBP对正己烷导致的氧化应激和Nrf2转录因子及其下游Ⅱ相解毒酶的表达有拮抗作用。<br>　　(2)本实验条件下，正己烷染毒对雌激素分泌没有明显干扰作用，但FSH、E2和PROG的分泌水平与正己烷染毒剂量变化相关，具有一定的剂量-效应关系。LBP可缓解高剂量正己烷诱导的大鼠血清性激素FSH和PROG的下调，对下丘脑-垂体-卵巢轴有一定的保护作用。<br>　　(3)一定剂量(1350、2700 mg/kg)的正己烷染毒能通过上调雌激素受体转录因子ERα、GPER1表达，下调ERβ表达引起卵巢和生殖系统紊乱。LBP通过影响GPER1敏感性，缓解其过表达，从而发挥生殖保护作用。<br>　　(4)正己烷引起的氧化应激状态下，ERα、GPER1表达上调在一定程度上调控Nrf2信号通路的激活。LBP可能通过下调GPER1表达，引起Nrf2信号因子表达下降而发挥抗氧化作用。LBP单独作用可激活Nrf2信号通路，调控ERα、ERβ和GPER1的表达。