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摘要目的<br>　　后发性白内障(posterior capsular opacification, PCO)是现代白内障手术后常见并发症之一，残留的晶状体上皮细胞(lens epithelial cells, LECs)发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是PCO发生的病理基础。EMT也是恶性肿瘤发生的关键机制，Notch信号的上调、下调或结构改变与多种恶性肿瘤的发生关系密切。microRNA34a(miR-34a)作为一种有效的抑癌基因，其上调可诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。本研究通过活体动物模型探讨miR-34a/Notch信号通路在LECs-EMT表型获得中的作用。鉴于晶状体再生过程是PCO进程的延续；角膜上皮与晶状体在胚胎发育早期具有相同的组织来源；活体动物前房内注入Notch信号通路阻滞剂(DAPT)对眼前节所有组织结构都会产生相应影响等原因，本研究一并观察miR-34a/Notch信号通路在晶状体再生及角膜上皮损伤修复中的作用机制，以及其改变对这两种生物学进程的影响。<br>　　方法<br>　　第一部分：构建大鼠PCO模型，眼前节照相、HE染色比较正常组及前房内分别注入1μmol、5μmolDAPT组PCO的发展变化，RT-qPCR检测各组中后囊膜组织标本的Notch信号通路标志物表达，包括受体Notch1、Notch2，配体Jag1、DLL1及下游基因Hes1；EMT过程转化因子标志物表达，包括Snail，Slug及锌指E-box结合同源框1；间充质细胞标志物表达，包括α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白及细胞核增殖标志Ki67以及miR-34a的表达；<br>　　第二部分：构建大鼠晶状体再生模型，眼前节照相、HE染色观察晶状体再生的形态学改变，RT-qPCR检测再生晶状体组织标本的Notch信号通路标志物表达，包括受体Notch1、Notch2，配体Jag1；晶状体纤维标志物表达，包括晶状体蛋白，串珠状纤维结构蛋白1及水通道蛋白；晶状体生长诱导因子表达，包括纤维母细胞生长因子2以及miR-34a的表达；<br>　　第三部分：构建大鼠角膜上皮损伤修复模型，眼前节照相、HE染色比较正常组及结膜下注射1μmol、5μmolDAPT组上皮损伤修复的发展变化，RT-qPCR检测各组中角膜组织标本的Notch信号通路标志物表达，包括受体Notch1、Notch2，配体Jag1；角膜上皮细胞标志物表达，包括闭锁连接蛋白1，角蛋白12及细胞核增殖标志Ki67以及miR-34a的表达。<br>　　结果<br>　　1.大鼠PCO模型研究发现，Notch信号通路表达在晶状体囊外摘出术(extracapsular lens extraction，ECLE)术后3天(day，d)开始升高，7-14d达到高峰，21-28d左右回到基线，EMT重要转化因子和间充质细胞标志物随时间轴的变化规律与其高度一致；miR-34a表达在ECLE术后渐降低，7d左右达到低谷，14d开始逐渐升高，28d时成倍数增加。5μmolDAPT前房内注射后，抑制Notch通路的同时也抑制了EMT的发展进程，3-14d时抑制效果更为显著；而miR-34a的表达升高，7-14d时与正常组相比差异具有统计学意义；<br>　　2.大鼠晶状体再生模型研究发现，ECLE术后30d左右，再生晶状体纤维细胞增殖较快，至术后60d-90d时基本达到正常晶状体大小，但再生晶状体内部可见部分混浊，结构错乱、松散。晶状体再生过程中，miR-34a表达升高，靶向负调控Notch信号通路相关标志物表达下降，促进已分化的晶状体纤维细胞增殖，但晶状体纤维标志物及晶状体生长诱导因子的表达均低于正常，差异具有统计学意义；<br>　　3.大鼠角膜上皮损伤模型研究发现，Notch通路相关标志物表达在伤后逐渐降低，24-48h达到最低谷，后逐渐回升，至72h时仍未升至正常未损伤状态时的表达水平；而miR-34a表达在伤后逐渐升高，至24h左右达到高峰，后逐渐降低，至观察结束时，其表达尚未回到正常未损伤状态，miR-34a的表达变化与Notch信号通路的表达变化呈负相关。修复早期，miR-34a表达升高，Notch信号通路表达降低，促进上皮细胞增殖，创面快速愈合；修复中晚期，miR-34a表达降低，Notch信号通路表达升高，抑制上皮细胞过度增殖，促进分化，从而促进了角膜上皮层屏障功能的恢复。5μmolDAPT结膜下注射后，有效抑制Notch信号通路的同时促进上皮细胞分化及屏障功能的恢复，但对增殖无明显影响。<br>　　结论<br>　　PCO发生过程中，miR-34a-Notch信号通路调控LECs-EMT的变化，5μmolDAPT前房内注射的抑制效果更为显著，将miR-34a-Notch信号通路作为靶点可能为未来PCO的治疗提供新的思路和方向；晶状体再生过程中，miR-34a表达升高，靶向负调控Notch信号通路，促进已分化的晶状体纤维细胞增殖，但再生晶状体相关功能和结构低于正常；角膜上皮损伤修复过程中，miR-34a-Notch信号通路调控上皮细胞在不同时间段增殖和分化的程度，5μmolDAPT结膜下注射，促进修复中晚期上皮细胞的分化及屏障功能的恢复，但对增殖无明显影响。