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摘要液-液相分离是促进细胞中无膜细胞器形成的主要机制，其主要特征是存在局部高浓度的生物大分子，能将酶和底物浓缩在一个小区室中使得酶促反应高效完成，之外还参与许多生物学过程，包括转录、信号转导、RNA加工等。然而，相分离是否调控RNA剪接过程尚不清楚。SKIP作为剪接复合体C的核心组分之一，是调控pre-mRNA剪接的关键因子，有研究通过核磁共振的方法发现其N端59-129位氨基酸是无序区域，在特定条件下此结构会发生无序到有序的转变，说明SKIP可能具备相分离能力。本研究以SKIP为切入点探讨相分离与RNA剪接过程之间的关系，这将有助于我们更好地了解剪接过程。<br>　　为了探讨SKIP是否具有发生相分离的能力及其相分离的生物学功能，我们首先体外纯化了SKIP的1-129位氨基酸(SKIP-IDR)，通过液滴形成实验发现其能在镜下观察到圆球状液滴结构，提示SKIP-IDR可能发生相分离。相分离是由多价大分子的相互作用驱动的，如疏水相互作用，静电相互作用。于是我们用能破坏疏水相互作用的1，6-己二醇处理液滴结构，结果发现SKIP-IDR的液滴结构明显变小。通过荧光漂白恢复实验，我们发现SKIP-IDR相分离形成的液滴结构具有较好的流动性。接着在细胞中探讨SKIP发生相分离的能力，通过内源免疫荧光染色、1，6-己二醇处理和荧光漂白恢复实验，我们发现细胞中SKIP的细胞核斑点状结构具有液体特性。总的来说通过体内外实验都证明了SKIP能发生相分离。此外，我们发现SKIP无序区域的酪氨酸对其发生相分离至关重要。SKIP作为一个剪接因子，能很好的定位在nuclearspeckle中，而突变的SKIP在细胞中呈现弥散状态，这提示SKIP参与剪接的功能可能是通过相分离实现的。为研究SKIP参与剪接是否依赖其相分离，我们构建了SKIP相分离缺失突变体，并研究其对SKIP靶基因(sororin和APC2)的RNA剪接的影响。通过qPCR实验，我们发现表达SKIP能弥补敲低SKIP引起的靶基因剪接缺陷，而过表达SKIP相分离缺失突变型出现了与敲低SKIP类似的现象，说明SKIP的相分离在调节sororin、APC2的pre-mRNA剪接过程中起重要作用。剪接体组装激活过程中会去除U1、U4，同时招募PRP19复合物和PRP19相关蛋白等。SKIP属于PRP19相关蛋白，我们发现SKIP能帮助PRP19、CDC5L招募到nuclearspeckle上，而突变的SKIP呈弥散状态同时也影响了PRP19、CDC5L的nuclearspeckle定位，提示SKIP相分离可能在剪接体激活过程中扮演重要作用。之前的研究发现SKIP通过影响sororin、APC2的pre-mRNA剪接从而调控姐妹染色单体粘连。为研究SKIP的相分离是否参与调控姐妹染色单体粘连，我们通过核型染色实验发现表达SKIP能恢复SKIP缺失引起的姐妹染色单体粘连异常，而表达SKIP相分离缺陷的突变出现的表型与敲低SKIP一样，说明SKIP能通过相分离调节姐妹染色单体粘连。<br>　　本研究揭示了相分离与pre-mRNA剪接之间的联系，提示SKIP被招募到剪接体后发生相分离，并为后续相关分子的添加提供结合位点，建立了相分离与剪接体激活之间的联系。