检索历史 清除

摘要【目的】<br>　　结直肠癌是一种由基因、表观遗传和环境因素改变而引起的恶性肿瘤，是全球发病率较高的三大癌症之一。转移是引起结直肠癌高死亡率的最主要原因，而目前结直肠癌发生发展的机制尚不十分明确。本研究旨在探讨ALKAL1在结直肠癌发生发展中的临床意义及作用机制，为结直肠癌靶向药物的研发提供理论依据。<br>　　【方法】<br>　　采用TCGA公共数据库分析结直肠癌组织中ALKAL1mRNA表达水平和采用免疫组化检测江门中心医院377例的结直肠癌石蜡标本中ALKAL1蛋白质的表达水平；采用RT-qPCR及Westernblotting法检测了10例江门中心医院新鲜配对的癌旁组织和结直肠癌组织标本以及8株结直肠癌细胞Caco-2、DLD-1、HCT-8、LS174T、RKO、SW480、SW620和T84中ALKAL1mRNA及蛋白的表达水平；采用lipo2000将sh-ALKAL1#1和sh-ALKAL1#2质粒转染于结直肠癌细胞RKO和SW480中，构建瞬时敲低ALKAL1的结直肠癌细胞株RKO和SW480；采用CCK8法、平板克隆法检测ALKAL1对结直肠癌细胞增殖的影响，流式细胞术检测ALKAL1对结直肠癌细胞周期的影响；软琼脂克隆形成实验检测ALKAL1对结直肠癌细胞非锚定生长能力的影响；划痕和Tranwell法检测ALKAL1对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响，Westernblotting及RT-qPCR法检测ALKAL1对结直肠癌细胞中迁移、侵袭相关mRNA和蛋白的表达水平；将SW480结直肠癌细胞敲低ALKAL1后，皮下注入裸鼠体内观察ALKAL1对结直肠癌细胞体内成瘤能力的影响并且对肿瘤组织进行HE染色；最后采用GSEA信号通路富集分析和Westernblotting法进行机制研究。<br>　　【结果】<br>　　TCGA公共数据库及临床样本分析发现ALKAL1在结直肠癌标本中显著高表达；Westernblotting及RT-qPCR结果显示ALKAL1的蛋白质和mRNA在结直肠癌细胞中高表达；CCK8、平板克隆形成实验结果显示沉默ALKAL1不影响结直肠癌细胞体外增殖；流式细胞术结果显示沉默ALKAL1不影响结直肠癌细胞的细胞周期分布；软琼脂克隆形成实验结果显示，沉默ALKAL1后可明显降低结直肠癌细胞的非锚定生长能力；划痕及Transwell小室结果显示，与对照组相比，沉默ALKAL1后可明显抑制结直肠癌细胞迁移、侵袭能力，RT-qPCR及Westernblotting结果表明，沉默ALKAL1后可显著抑制结直肠癌细胞中LIMK1、ROCK1、MMP3、MMP9的mRNA及蛋白质的表达水平；体内成瘤实验结果显示沉默ALKAL1后可明显抑制结直肠癌细胞的致瘤能力；GSEA分析发现高表达ALKAL1显著富集到与SHH信号通路相关的基因集，Westernblotting结果也显示沉默ALKAL1后能降低GLI1蛋白质在细胞核内表达水平及PTCH的总蛋白水平；SHH信号通路激动剂上调沉默ALKAL1诱导的结直肠癌细胞迁移侵袭能力。<br>　　【结论】<br>　　ALKAL1在结直肠癌组织标本及细胞中表达显著升高，高表达ALKAL1与结直肠癌患者较差的生存预后及晚期的临床病理分期相关；沉默ALKAL1通过抑制SHH信号通路抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭能力。