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摘要研究表明，miRNA的异常表达与癌症等多种人类疾病密切相关，其含量可以用于癌症早期诊断和发展程度的判断。然而，由于大多数miRNA标志物并不是特异性地对应某一种癌症，单一的标志物检测方法在癌症诊断中时有假阳性结果出现。因此，发展基于两种miRNA标志物的检测方法来提高诊断精准度在癌症诊断中尤为重要。DNA四面体可以提高探针在复杂生物环境中的稳定性，且具有优良的生物相容性及良好的细胞膜穿透性；DNA四面体具有多个顶点，易于修饰功能化核酸，可构建诊疗一体化探针，十分适用于细胞内的检测以及生物医药领域的研究。结合DNA四面体与DNA链置换反应，设计了双miRNA调控的无需转染的癌细胞精准诊疗探针，该方法可以实现肝癌细胞系Huh7的高特异性识别，以及目标癌细胞的精准杀伤。具体内容如下：<br>　　(1)基于双miRNA的DNA四面体探针用于癌细胞的精准识别<br>　　发展用于在分子水平上精准区分不同类型的癌细胞的策略对于疾病的诊断具有重大意义。本工作设计了基于双miRNA控制的DNA四面体探针用于癌细胞Huh7的精准识别。该探针由DNA四面体支架和连接在上面的三个功能化的双链组成，最初荧光基团保持“OFF”的状态。探针进入特定的细胞，当miR-21和miR-122都存在时可引发两个连续的链置换反应，最终荧光基团和猝灭基团远离，荧光恢复。通过DNA四面体可将所有识别和报告模块集成到单个结构中，且探针无需转染试剂即可进入细胞，能从正常细胞及其它癌细胞中识别出目标癌细胞Huh7并且进行成像。<br>　　(2)基于双miRNA的DNA四面体探针用于癌细胞的精准杀伤<br>　　上述工作提高了探针识别癌细胞的精准度，本工作在此基础上，进一步以精准杀伤为目标，构建了双miRNA调控的DNA四面体探针用于目标癌细胞的精准光动力学杀伤。与单个miRNA相比，利用双miRNA表达模式可以提高诊疗的准确性。利用DNA四面体将探针转染进细胞，基于miR-21和miR-122的“AND”逻辑门可以用作DNA计算设备，通过链置换级联，使得标记有Ce6的DNA链和猝灭基团远离，从而对目标肿瘤细胞进行光动力学杀伤。