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摘要【研究背景】<br>　　乳牙生理性根吸收是儿童顺利完成乳牙脱落和继承恒牙萌出这一过程中最重要的生理变化之一。这一过程发生异常会造成乳恒牙替换紊乱，临床上常见的表现为乳牙滞留、继承恒牙异位萌出以及错牙合畸形，严重时会引起颌面部畸形等情况，严重危害儿童的身心健康。本文作者通过文献回顾及前期研究推测，机械应力可能在生理性根吸收过程中发挥重要作用，特别在儿童的生长发育期，随着颌面部骨骼及肌肉的发育，不断增强的咬合力可能通过调控PDLSCs中α7nAChR的表达，引起成骨/破骨相关因子表达的改变，从而调节生理性根吸收过程。<br>　　【研究目的】<br>　　研究机械应力作用下PDLSCs在乳牙生理性根吸收过程中的作用，进一步了解乳牙生理性根吸收过程和乳恒牙替换机制，为临床上防治因乳牙生理性根吸收异常引起的乳牙滞留、恒牙异位萌出及错牙合畸形提供新的思路。<br>　　【方法与结果】<br>　　第一部分不同根吸收时期乳牙及恒牙PDLSCs的分离、培养和鉴定<br>　　临床上收集新鲜拔除的乳恒牙，根据牙根吸收程度分为牙根未吸收乳牙、牙根吸收乳牙及恒牙组，通过有限稀释法分离培养PDLSCs并进行鉴定。结果显示各实验组细胞都具有成骨、成脂分化能力，间充质细胞标志物STRO-1、CD73、CD90、CD105、CD146呈阳性，而造血细胞标志物CD14、B细胞标志物CD19、内皮标志物CD34和全白细胞标志物CD45和HLA-DR呈阴性，符合间充质干细胞特征。<br>　　第二部分机械应力对不同根吸收时期PDLSCs的影响<br>　　为了探索机械应力对不同根吸收时期乳牙及恒牙PDLSCs的影响，本研究使用我院自行研发的细胞压力加载装置模拟PDLSCs在咀嚼过程中的受力情况，并通过CCK-8，流式细胞技术，qRT-PCR及WesternBlot等方法观察不同程度流体动态压力对不同根吸收时期乳牙及恒牙PDLSCs增殖能力、细胞周期、凋亡水平、成骨及破骨相关因子表达的影响。结果显示不同根吸收时期乳牙及恒牙PDLSCs对流体动态压力的耐受性不同，其中牙根未吸收期乳牙PDLSCs对力学刺激更加敏感，而恒牙PDLSCs对力学刺激的敏感性相对较弱。0-180KPa以内的流体动态压力对不同根吸收时期乳牙及恒牙PDLSCs的增殖活性无影响；不同根吸收时期乳牙及恒牙PDLSCs受力后细胞周期改变，表现为G1期细胞增多，S期细胞减少；一定程度的流体动态压力可引起PDLSCs凋亡水平上升，成骨/破骨相关因子中RUNX2，ALP和OPG的表达显著降低，RANKL的表达显著增高，RANKL/OPG比值显著增加。<br>　　第三部分机械应力对不同根吸收时期PDLSCs中α7nAChR表达的影响<br>　　为了观察机械应力对不同根吸收时期PDLSCs中α7nAChR表达的影响，探索α7nAChR与成骨/破骨相关因子表达水平的相关性，了解机械应力参与乳牙生理性根吸收可能的机制，本研究通过qRT-PCR，WesternBlot，成骨诱导及茜素红染色定量分析的方法观察流体动态压力对不同根吸收时期PDLSCs中α7nAChR表达的影响，并观察牙根未吸收时期乳牙PDLSCs在阻断α7nAChR作用后成骨/破骨相关因子的表达及成骨诱导分化情况。结果显示在0-135KPa流体动态压力作用下，牙根未吸收组乳牙α7nAChR表达显著上调，而相比之下牙根吸收组则略有升高。流体动态压力作用下PDLSCs中RUNX2，ALP和OPG的表达降低，RANKL的表达增高，成骨分化能力降低；该表现可被α7nAChR拮抗剂α-BTX逆转。<br>　　第四部分机械应力作用下α7nAChR通过Wnt通路调控PDLSCs成骨/破骨分化能力<br>　　为了观察机械应力作用下α7nAChR是否通过激活Wnt信号通路调控PDLSCs成骨/破骨分化能力，进一步了解机械应力参与乳牙生理性根吸收可能的机制，本研究通过qRT-PCR，WesternBlot，成骨诱导及茜素红染色定量分析的方法观察流体动态压力作用下，牙根未吸收期乳牙PDLSCs中Wnt信号通路相关因子的表达和成骨/破骨分化能力。结果发现在流体动态压力作用下牙根未吸收期乳牙PDLSCs中Gsk-3β、p-Gsk-3β、total-β-catenin、active-β-catenin的表达受α7nAChR的调控。而使用Wnt通路拮抗剂DKK1可以逆转流体动态压力对PDLSCs中成骨/破骨相关因子表达及成骨分化能力的影响。<br>　　【结论】<br>　　机械应力可通过PDLSCs调控乳牙生理性根吸收。其具体机制是通过上调α7nAChR的表达，通过Wnt信号通路的作用调控PDLSCs中成骨/破骨相关因子的表达及调控PDLSCs成骨/破骨分化能力，进而影响乳牙生理性根吸收进程。