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摘要目的研究不同处方配比及不同提取方法的贾氏银柴退热汤提取物的解热、镇痛、抗菌、抗炎作用，验证处方配比并进行提取工艺的初探；采用响应曲面法从多指标、综合评价的角度确定贾氏银柴退热汤的最佳提取工艺；优选银柴退热颗粒的最佳成型工艺并进行中试生产研究；制定银柴退热颗粒的质量标准(草案)；对中试产品进行质量检验和稳定性考察；研究银柴退热颗粒和银柴退热口服液在抗菌解热抗炎镇痛方面的药效学等效性，为临床合理用药提供参考；运用网络药理学研究方法探讨贾氏银柴退热汤治疗急性上呼吸道感染的作用机制。<br>　　方法1.考察银柴退热汤供试品1-6(供试品1~3处方金银花∶柴胡配比分别为1∶1、2∶1、1∶2，提取方法为水煎煮法；供试品4~6处方金银花：柴胡配比分别为1∶1、2∶1、1∶2，提取方法为双提法)对金黄色葡萄球菌活性、干酵母致大鼠发热模型、鸡蛋清致大鼠足肿胀模型及醋酸致小鼠扭体反应的影响。<br>　　2.采用HPLC法定量分析，以绿原酸和黄芩苷的转移率为响应值，采用响应曲面法中的Box-BehnkenDesign(BBD)模式，对贾氏银柴退热汤的提取工艺参数煎煮时间(A)、煎煮次数(B)、加水量(C)进行优选分析。<br>　　3.以成型率、溶化性、休止角等参数为指标对传统湿法制粒的最佳制剂工艺进行筛选；以成型率为指标对喷雾制粒的辅料量、制粒温度、辅料配比进行了优选；结合中试生产试验结果，建立银柴退热颗粒的成型工艺，确定主要技术参数及辅料的种类和用量。<br>　　4.从鉴别、指纹图谱、检查(制剂通则检查、砷盐检查、重金属及有害元素检查、微生物限度检查)、含量测定四个方面，对银柴退热颗粒的质量标准进行研究。鉴别包括性状和薄层色谱鉴别；采用HPLC法，建立指纹图谱的测定方法，使用中国药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A版”，对11批银柴退热颗粒的指纹图谱进行相似度评价；根据《中国药典》2015年版四部通则0104“颗粒剂”项下要求，对银柴退热颗粒的粒度、水分、干燥失重、溶化性、装量差异、微生物限度进行检查；重金属检查采用第二法(《中国药典》2015年版四部通则0821)，砷盐检查采用古蔡氏法(《中国药典》2015年版四部通则0822)；采用原子吸收分光光度法对有害元素Cu、Pb、Cd进行测定，其中Cu采用火焰法，Pb、Cd采用石墨炉法；采用HPLC法，对处方中君药金银花、连翘、黄芩和柴胡的有效成分进行测定。<br>　　5.按照质量标准(草案)，在市售包装条件下，对银柴退热颗粒的3批中试产品进行了6个月稳定性试验和加速试验研究[加速试验条件为温度(40±2℃)、湿度(75±5%)，长期稳定性试验条件为温度(25±2℃)、湿度(60±10%)]。<br>　　6.通过对金黄色葡萄球菌的抑制作用、干酵母致大鼠发热模型、鸡蛋清致大鼠足肿胀、二甲苯致小鼠耳肿胀炎症模型、醋酸致小鼠扭体反应和热板法，比较银柴退热颗粒和银柴退热口服液在抗菌解热抗炎镇痛方面的药效学等效性。<br>　　7.通过中药系统药理学数据库(TCMSP)收集贾氏银柴退热汤处方所含药味的相关活性成分；Swiss靶标预测数据库(SwissTargetPrediction)各成分靶点；通过治疗靶标数据库(TTD)，Drugbank，疾病-基因网数据库(DisGeNET)获取急性上呼吸道相关靶标；韦恩图获得相关交集；使用STRING网站进行靶点蛋白互作分析，运用Cytoscape3.7.1进行结果可视化；利用DAVID数据库进行基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析，探寻贾氏银柴退热汤的活性成分、对应靶标，作用靶点及信号通路。<br>　　结果1.供试品1-6组与模型组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)。不同处方配比、不同提取工艺的银柴退热汤流浸膏均有一定的抗菌、解热、抗炎、镇痛作用，金银花∶柴胡配比为1∶1、提取工艺为双提法时，其抗菌、解热、抗炎、镇痛作用更明显。<br>　　2.建立了贾氏银柴退热汤提取物中绿原酸、黄芩苷的含量测定方法；贾氏银柴退热汤的最优提取条件为：煎煮时间60min、煎煮2次、加12倍量水。<br>　　3.传统干法制粒的最佳工艺为：浸膏粉与辅料用量为1∶0.3，辅料为糖粉∶糊精=2∶1，矫味剂阿斯巴甜加入量为1%，喷入90%乙醇适量；喷雾制粒的最佳工艺：浸膏的相对密度为1.20，进风口温度－出风口温度90~40，喷雾速率10Hz，糖粉：糊精比例为1∶1；喷雾制粒工序少，制粒全过程是密闭操作，粉尘少，有利于减少有效成分损失，更能符合GMP标准，且目前药厂大生产多采用喷雾制粒设备，故确定制粒方法为喷雾制粒。<br>　　4.本品为黄棕色至棕褐色的颗粒，味微甜、微苦；薄层色谱鉴别中，最终确定了柴胡、黄芩、金银花、连翘、紫花地丁、大青叶共6味药的薄层色谱鉴别方法；指纹图谱研究中，确定共有峰15个，指认出10个共有峰，分别为：峰1新绿原酸，峰2&nbsp;绿原酸，峰4咖啡酸，峰5隐绿原酸，峰9连翘酯苷A，峰10异绿原酸B，峰11异绿原酸A，峰12异绿原酸C，峰13黄芩苷，峰15汉黄芩苷；银柴退热颗粒的粒度、水分、干燥失重、溶化性、装量差异、微生物限度检查结果均符合2015年版四部通则0104“颗粒剂”项下要求；银柴退热颗粒三批中试产品砷盐检查含量限度均小于2ppm，重金属检查含量限度均小于10ppm，有害元素检查中各元素平均含量为：Cu1.83mg/kg、Pb0.32mg/kg、Cd0.22mg/kg；建立了银柴退热颗粒的多指标-HPLC含量测定方法，最终确定银柴退热颗粒每袋含金银花、牛蒡子以绿原酸(C16H18O9)计，不得少于6.3mg；含连翘以连翘酯苷A(C29H36O15)计，不得少于11.8mg；含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于40.0mg。建立了银柴退热颗粒的质量标准(草案)。<br>　　5.银柴退热颗粒的外观性状、鉴别、溶化性、水分含量、粒度、含量测定等均符合质量标准(草案)规定。<br>　　6.银柴退热颗粒和口服液组解热镇痛抗菌抗炎药理作用与模型组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05)。银柴退热颗粒和口服液组间比较差异不明显，具有药效学等效性。<br>　　7.贾氏银柴退热汤所含中药活性成分共322个，对应不同的靶标1088个，收集与急性上呼吸道感染相关的靶点623个，贾氏银柴退热汤主要作用于TNF、Toll样受体、NOD样受体、MAPK、T细胞受体信号通路等，主要涉及炎症与免疫调控。<br>　　结论不同处方配比、不同提取工艺的贾氏银柴退热汤提取物均具有不同程度的抑菌、解热、抗炎、镇痛作用，金银花∶柴胡为1∶1、提取工艺为双提法时，抗菌、解热、抗炎、镇痛作用更明显。优选得到的提取工艺和成型工艺稳定可行，可操作性强，适合于批量生产。建立了银柴退热颗粒的质量标准(草案)并进行稳定性考察，说明银柴退热颗粒质量及工艺稳定、可靠。银柴退热颗粒和口服液均有不同程度的抑菌、抗炎、解热、镇痛作用，组间比较差异不明显，具有药效学等效性。贾氏银柴退热汤治疗急性上呼吸道感染的各作用通路间相互关联，起到消除炎症、抑制活化的细胞因子、缓和过激的免疫反应的作用，与传统中药复方所具有的整体调节性特征相契合，体现了中医药多成分-多靶点-多通路的作用特点，为后续的作用机制研究和临床用药提供参考。