摘要感音神经性耳聋通常是由于耳蜗毛细胞的不可逆损失导致的。目前,还没有合适的方法治疗由毛细胞的缺失导致的感音神经性耳聋。干细胞发育生物学的最新进展通过毛细胞再生提供了治疗感音神经性耳聋的希望。了解耳蜗前感觉上皮的发育形成将有助于我们探索毛细胞再生恢复听力的发育机制。在耳蜗前感觉上皮形成的过程中,通过早期Isl1,Gata3和他们的负调控因子Lmo4部分重叠的表达,我们假设一个耳蜗前感觉上皮形成的调控模型,其中Isl1和Gata3的表达使耳蜗腹侧前感觉上皮区域形成前感觉上皮,而Lmo4抑制其他区域Isl1和Gata3转录活性。前期研究表明,Lmo4缺失导致耳蜗异位内、外毛细胞和支持细胞的形成;相反的,Gata3缺失导致耳蜗前感觉上皮区域标记蛋白Sox2,P27的损失和感觉上皮区域的消退,这些前期结果都符合假设的模型。为了进一步验证该模型,我们构建了Isl1(floxp/floxp)小鼠,并通过Pax2Cre工具鼠繁育和基因鉴定得到Isl1Cko(条件性敲除)小鼠。通过得到的Isl1Cko小鼠,研究Isl1是否对早期耳蜗前感觉上皮的形成起作用。为了阐明Isl1,Gata3和Lmo4在耳蜗前感觉上皮形成中的作用机制,我们拟通过细胞转染、免疫共沉淀等技术验证ISL1、GATA3和LDB1是否在体外形成ISL1-GATA3-LDB1蛋白复合物,以及LMO4是否通过竞争性的结合LDB1抑制该蛋白复合物的形成。研究结果表明,Isl1和Gata3表达具有一致性,而Isl1与Lmo4的表达模式不同。Isl1的缺失导致Gata3标记和Sox2标记的听神经数量明显减少,但Isl1的缺失对前感觉上皮区域的Sox2,Jag1和P27蛋白的表达没有影响。Isl1和Lmo4均能与Ldb1之间存在直接的蛋白相互作用关系,但Ldb1作为Isl1(或Lmo4)与Gata3之间的桥梁从而形成Isl1(或Lmo4)/Ldb1/Gata3蛋白复合体结论不能得出,这个是由于体外细胞水平下Ldb1与Gata3不存在直接的相互作用而导致的。本研究旨在阐明转录因子Isl1蛋白复合物在耳蜗前感觉上皮形成中的作用,为感音神经性耳聋的形成提供了一个重要的分子生物学信息;同时有利于加快发现新的感音神经性耳聋基因,并为我们致力于耳蜗毛细胞再生来恢复听力提供帮助。此外,探索LDB,LIM结构域和GATA蛋白之间的相互作用将提高我们在耳蜗和其他器官组织发育作用中的认识。
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