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摘要背景：<br>　　肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是由于基因组改变和细胞信号通路异常激活而致的复杂且高异质性疾病，在全球癌症相关死亡原因位居第二。目前，肝切除和射频消融是临床治疗肝癌的常用方法，但仍有许多患者发生肿瘤复发，预后差。因此全面掌握HCC发生发展的内在机制，有助于探索新的治疗方案。<br>　　多项研究指出STAT6参与了淋巴瘤、前列腺癌及结直肠癌等发展。此外，铂类药物通过阻断头颈癌鼠中STAT6表达可明显改善癌症鼠预后。RANKL参与多种生理病理过程中，包括破骨细胞分化、肝胰岛素抵抗和癌变等。有证据表明NF-kB在肝脏缺血再灌注、肝再生和癌症中发挥重要作用。而RANK及其配体RANKL能显著提高NF-kB的活性。膜结合的RANKL在许多类型的癌症如前列腺癌和头颈癌中都有高水平的表达。所以，STAT6及RANKL是否参与HCC的发生和发展和对肝癌细胞调控机制以及二者之间存在联系值得探讨。<br>　　目的：<br>　　基于上述思考，本研究旨在①研究沉默HepG2和Hep3B肝癌细胞中STAT6的表达后肿瘤细胞增殖情况；②探索沉默STAT6后对于HepG2和Hep3B细胞的凋亡影响，检测细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax和caspase-3/7表达情况；③探讨STAT6的沉默对HepG2和Hep3B细胞中RANKL的表达影响；④明确STAT6和RANKL之间在对于肝癌细胞调控上存在的关系，研究通过调节二者之间的关系来抑制肿瘤细胞的发展，从而为建立新的肿瘤治疗策略提供理论和实验依据。方法：<br>　　选择人肝癌细胞株HepG2和Hep3B细胞体外培养，根据实验目的选择不同质粒转染，分别通过XTT法测试HepG2和Hep3B肝癌细胞不同时间点的细胞活力；MTT法检测转染后48h细胞增殖情况，通过组蛋白DNAELISA定量测定各组细胞凋亡；通过RT-PCR检测各实验组细胞转染后细胞中STAT6mRNA以及RANKLmRNA情况;WesternBlot测定各组的HepG2和Hep3B肝癌细胞STAT6、RANKL的表达，Bax、Bcl-2、Caspase-3/7基因的表达以及活力。统计分析使用SPSS13.0软件，数据以“均值±标准差”表示。使用单因素方差分析和(或)t检验来确定两组之间的统计学差异。当P＜0.05时可认为结果存在显著差异。<br>　　结果：<br>　　1.STAT6的沉默抑制HepG2和Hep3B细胞生长<br>　　在STAT6siRNA或pcDNA3.1-STAT6转染的细胞中STAT6表达显着降低或增加。XTT检测发现在不同时间点STAT6siRNA转染的细胞中细胞的活力下降，而pcDNA3.1-STAT6转染的细胞中增加。这说明STAT6siRNA抑制细胞增殖，而STAT6过表达促进HepG2和Hep3B细胞中的细胞增殖。<br>　　2.STAT6的沉默诱导HepG2和Hep3B细胞的凋亡<br>　　组蛋白结合的DNAELISA检测细胞凋亡，STAT6沉默组HepG2和Hep3B细胞凋亡率明显增加。WesternBlot检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达，与空白对照组相比，STAT6沉默组促凋亡蛋白Bax的水平明显升高，并且抑制了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，Bax/Bcl-2的比值明显增大。此外，沉默STAT6表达可增加caspase-3/7活化。<br>　　3.STAT6的沉默抑制HepG2和Hep3B细胞中RANKL的表达<br>　　RT-PCR结果提示STAT6沉默显著降低了HepG2和Hep3B细胞中RANKL基因表达水平。此外，WesternBlot显示，相对于空siRNA质粒转染的细胞，STAT6沉默抑制了HepG2和Hep3B细胞中的RANKL表达水平。<br>　　4.STAT6沉默抑制细胞生长并诱导肝癌细胞的凋亡，此作用可被RANKL的过表达抑制<br>　　沉默STAT6显著降低了RANKL的表达，而在HepG2和Hep3B细胞中这种效应被pcDNA3.1-RANKL转染后完全消除。沉默STAT6显著降低肿瘤细胞活力和增殖的作用也可以被pcDNA3.1-RANKL诱导的RANKL过表达而抵消。pcDNA3.1-RANKL介导的RANKL过表达，能够降低STAT6沉默诱导的HepG2和Hep3B细胞凋亡率和caspase-3活性。<br>　　结论：<br>　　STAT6沉默不仅显著抑制HepG2和Hep3B细胞的存活和增殖，还诱导凋亡相关基因Bax和caspase-3/7高表达，抑制抗凋亡基因Bcl-2表达水平。STAT6的沉默下调了RANKL的表达，但pcDNA3.1-RANKL治疗可以消除STAT6沉默所诱导的肝癌细胞凋亡和生长抑制。在对于肝癌细胞的调控上STAT6与RANKL存在着一定的联系，沉默STAT6可通过降低RANKL表达而诱导肝癌细胞凋亡和抑制增殖。