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摘要目的<br>　　高尔基体磷酸化蛋白73(GOLM1/GP73)是一种高度磷酸化和高度糖基化的高尔基体蛋白。由于GP73在肝脏疾病相关的病理组织，尤其是肝癌组织中呈高表达，因此GP73被视作一种新型肝癌诊断标志物，广泛应用于肝癌的临床诊断。近年来有报道指出，高表达的GP73可促进肝癌转移，但具体的分子调控机制尚未被研究透彻。本研究拟阐述GP73如何在肝癌缺氧微环境中被转录激活，以及在缺氧微环境下促进肝癌细胞转移的分子机制。<br>　　方法<br>　　1.通过免疫印迹和细胞划痕实验，确定c-Myc和GP73在处于缺氧环境中的肝癌细胞中的表达相关性，以及对肿瘤转移的促进作用。<br>　　2.在体内外调控c-Myc的表达，通过免疫印迹和免疫组化实验确定c-Myc对GP73的正向调控作用。<br>　　3.通过染色质免疫共沉淀和双荧光素酶报告基因实验，确定c-Myc对GOLM1基因启动子的结合及转录激活作用。<br>　　4.通过荧光定量PCR和免疫印迹实验，确定c-Myc/GP73/MMP-7之间的调控关系。<br>　　5.通过基于临床样本的免疫荧光和灰度分析，确定GP73和MMP-7在肝癌病理组织中表达的正相关性。<br>　　6.通过分子生物学和蛋白转运相关实验，确定GP73协助参与MMP-7的胞内囊泡运输及胞外分泌过程，解释GP73促进肝癌细胞转移的分子机制。<br>　　结果<br>　　1.在缺氧条件下，随着O2浓度和时间梯度的变化，c-Myc和GP73在HepG2细胞中的表达呈正相关。<br>　　2.干预c-Myc表达后，体内外实验表明，c-Myc可正向调控GP73的表达。<br>　　3.染色质免疫共沉淀和双荧光素酶报告基因实验结果表明，c-Myc对GOLM1启动子具有转录激活作用。<br>　　4.体内外干预c-Myc或GP73，可正向调控肝癌细胞转移，且GP73是促进肝癌转移的主要因素。<br>　　5.转运相关实验结果表明，抑制GP73的表达和活性，可阻断MMP-7胞内转运。<br>　　6.免疫共沉淀和活细胞成像结果表明，GP73结合胞内MMP-7，并协助MMP-7的胞内转运和胞外分泌作用。<br>　　结论<br>　　1.c-Myc和GP73在肝癌病理组织中呈高表达，且二者表达量呈正相关。<br>　　2.肝癌细胞在微缺氧环境下，高表达的c-Myc转录激活GP73，促进细胞转移。<br>　　3.相比于c-Myc，GP73是促进肝癌细胞转移的主要因素。<br>　　4.抑制GP73的功能，可抑制MMP-7的分泌，抑制肝癌细胞转移。<br>　　5.GP73可结合MMP-7，协助MMP-7的胞内转运和胞外分泌。