检索历史 清除

摘要目的：<br>　　1.观察对比系统性硬皮病(SSc)患者受累皮肤组织及皮肤科手术患者正常皮肤病理切片，明确系统性硬皮病受累皮肤组织内皮间质转化(EndMT)进程，为后续进一步实验研究提供依据。<br>　　2.体外实验研究补肾益精法中药复方及单体熊果酸对内皮间质转化作用及机制，进一步明确补肾益精法中药复方治疗系统性硬皮病相关靶点、定位复方中有效中药单体，探索系统性硬皮病治疗新途径。<br>　　方法：<br>　　1.收集我院系统性硬皮病患者受累皮肤及皮肤科手术患者正常皮肤既往病理组织蜡块。重新切片、HE染色、EndMT相关标志物：CD34、FSP1免疫组织化学染色。观察对比血管变化、EndMT进程。<br>　　2.用TGF-β诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，建立SSc内皮间质转化体外细胞模型。分别用补肾益精法中药复方含药血清、熊果酸及伊马替尼(阳性对照)干预细胞模型。显微镜镜下观察各组细胞形态改变，QPCR、WesternBlot分别检测各组细胞Snail-1基因、蛋白表达水平，免疫荧光检测各组细胞CD31、α-SMA、Snail-1表达。<br>　　结果：<br>　　1.HE染色显示，正常皮肤组织毛细血管丰富，SSc患者受累皮肤组织毛细血管减少，真皮胶原纤维增粗，胶原间隙变窄；免疫组织化学染色显示，与正常皮肤组织相比，SSc患者皮损血管周围CD34阳性表达减少，FSP1阳性表达明显增多，提示SSc患者皮损发生EndMT。<br>　　2.显微镜下观察显示，正常HUVEC呈卵圆形，经TGF-β诱导，绝大部分细胞发生形态改变，呈梭型、不规则型；与模型组相比，熊果酸组、中药复方组、伊马替尼组梭型细胞比例不同程度减少，大部分细胞呈卵圆形。EndMT标志物免疫荧光结果显示，与正常组相比，模型组CD31表达减少，α-SMA表达明显增多，与模型组相比，熊果酸组、中药复方组、伊马替尼组CD31表达恢复，α-SMA表达不同程度降低。QPCR、WesternBlot及免疫荧光对Snail-1检测结果均显示，与正常组相比，模型组Snail-1表达升高，与模型组相比，熊果酸组、中药复方组、伊马替尼组Snail-1不同程度降低。<br>　　结论：<br>　　1.系统性硬皮病患者受累皮肤组织存在EndMT过程。2.补肾益精法中药复方及单体熊果酸均能抑制EndMT进程，作用机制可能与抑制Snail-1表达相关。