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摘要目的：动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种致病因素多样、发病机制复杂、潜在危害性大的常见病。酪氨酸磷酸酶SHP-2(Src hom ology 2 domain-containing protein tyrosine phosphatase，SHP-2)参与了胚胎发育、细胞代谢、增殖、凋亡等生理过程。AS发生的分子机制研究方向非常广泛,本课题组旨在研究蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2(Src homolog y 2-containing protein tyrosine phosphatase，SHP-2)在动脉粥样硬化发病过程中的作用，利用SHP-2特异性抑制剂PHPS1(phenylhydrazono pyrazolone sulfonate1，PHPS1)作用于apoE基因敲除小鼠(apoE-/-小鼠)，观察SHP-2对动脉粥样硬化的影响作用。<br>　　方法：<br>　　1．体内实验：<br>　　以1.25%胆固醇高脂饲料饲养apoE-/-小鼠4周构建早期AS模型。<br>　　将28只apoE-/-小鼠随机分为2组：对照组(等量生理盐水)和PHPS1(1.0mg/kg)处理组。16周后处死小鼠,眼球取血检测血糖和血脂水平。<br>　　降主动脉整体油红O染色、主动脉根部横切面苏木精-伊红(hemato-xylineosin staining，HE)染色评估斑块面积大小；免疫组化染色和天狼猩红染色分析斑块内细胞成分；qRT-PCR法检测斑块内清道夫受体蛋白CD36、SRA(scavenger receptorA，SRA)和Toll样家族受体2(Toll-like receptors2，TLR-2)和Toll样家族受体4(Toll-like receptors4，TLR-4)的mRNA变化情况；Westernblot法检测细胞外信号调节酶(extracellula r-regulated kinases，ERK)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphatid ylinositol 3-kinase /protein kinase B，PI3K/AKT)信号转导通路蛋白磷酸化水平。<br>　　2．体外实验：<br>　　PHPS1处理组每孔加0.25μl的氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL)(终浓度为50ng/ml)和1μl的PHPS1(10μmol/L)及1μl单分散荧光微球(终浓度为0.5μl/ml)，对照组每孔加0.25μl的ox-LDL(终浓度为50ng/ml)和1μlDMSO的生理盐水及的1μl单分散荧光微球(终浓度为0.5μl/ml)干预小鼠骨髓来源的原代巨噬细胞(Bo ne marrow-derived macrophage，BMDM)细胞16小时后，观察BMDM内绿色荧光沉积情况以评估巨噬细胞吞噬情况。<br>　　结果：<br>　　1.小鼠血清中血糖和血脂水平比较<br>　　PHPS1处理组与对照组比较，血糖和血脂水平相近(P＞0.05)，差异均无统计学意义。<br>　　2.组织切片染色结果<br>　　2.1降主动脉整体油红O染色结果比较<br>　　PHPS1处理组与对照组相比降主动脉油红O阳性面积(红色)显著增加(P＜0.05)，差异有统计学意义。<br>　　2.2apoE-/-小鼠主动脉根部石蜡切片HE染色、天狼猩红染色及免疫组化染色结果比较<br>　　PHPS1处理组与对照组相比，HE染色斑块总面积(P＜0.05)增大,差异有统计学意义；MAC-2免疫组化染色巨噬细胞阳性面积(P＜0.05)增大，差异有统计学意义；SMα-actin免疫组化染色平滑肌细胞阳性面积(P＞0.05)相近，差异无统计学意义；天狼猩红染色斑块内胶原阳性面积(P＞0.05)相近，差异无统计学意义。<br>　　3.BMDMs吞噬能力的影响<br>　　PHPS1处理组与对照组比较，PHPS1处理组BMDMs内部绿色荧光强度(P＜0.01)增加，差异有统计学意义。<br>　　4.清道夫家族受体CD36、SR-A1、Toll样家族受体TLR-2、TLR-4的mRNA表达量比较<br>　　与对照组相比，PHPS1处理组清道夫家族受体CD36、SR-A1mRNA表达量(P＜0.05)明显升高，差异有统计学意义；TLR-2、TLR-4的mRNA表达量(P＞0.05)相近，差异无统计学意义。<br>　　5.ERK和PI3K-AKT通路蛋白磷酸化水平的比较<br>　　与对照组相比，PHPS1处理组ERK(P＜0.01)，PI3K、AKT磷酸化水平(P＜0.05)明显升高，差异有统计学意义。<br>　　结论：<br>　　1.酪氨酸磷酸酶SHP-2抑制剂PHPS1增强了ERK及PI3K-AKT信号通路蛋白的磷酸化水平，促进巨噬细胞表面清道夫家族受体CD36、SRA1过表达。<br>　　2.PHPS1增加了巨噬细胞对ox-LDL的吞噬能力，最终促进巨噬细胞源性泡沫细胞的形成、加速AS进展。SHP-2在巨噬细胞源性泡沫细胞形成方面起了负向作用，是防止早期AS形成的因素，可以作为AS预防的研究靶点。<br>