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摘要目的：<br>　　本实验通过构建多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome ,PCOS)小鼠模型，通过促排卵过程使模型鼠怀孕并计算其胚胎丢失率。分析脂联素(adiponectin, APN)能否通过影响子宫组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)、磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol-3,PI3K)及蛋白激酶B(Protein kinaseB,Akt)的表达改善PCOS小鼠妊娠早期胚胎丢失率。探讨APN在妊娠早期胚胎发育中的作用及改善流产的机制。<br>　　通过体外培养PCOS模型孕鼠的绒毛滋养层细胞，研究APN能否通过激活AMPK/PI3K/Akt/Foxo3a通路抑制滋养细胞凋亡。从而对PCOS所致流产的病因提供新的理论依据，同时为其临床治疗提出新的思考方向。<br>　　方法：<br>　　1.对C57BL/6J小鼠皮下注射脱氢表雄酮并联合高脂饮食喂养建立PCOS模型。造模成功后对PCOS模型小鼠及正常对照组小鼠促排卵并使其受孕，检查到阴道栓记为孕0.5天。自模型小鼠孕3.5日起开始对PCOS实验组(C组)孕鼠连续皮下注射重组APN10μg/(kg ·d)，连续注射11天，对PCOS模型对照组(B组)及正常对照组(A组)孕鼠注射等量生理盐水，并于妊娠13.5日处死孕鼠，剖腹取出子宫，记录是否怀孕。如怀孕，则将胚胎挤出至培养皿中，详细记录胚胎的总数、大小及吸收胚胎的个数并计算胚胎吸收率。<br>　　2.取出孕鼠的子宫组织，用qPCR法检测各组小鼠子宫组织AMPK、PI3K、AktmRNA的相对表达情况，用Westernblot法检测p-AMPK、p-PI3K及p-Akt蛋白的相对表达量。<br>　　3.通过体外培养PCOS模型孕鼠的绒毛滋养层细胞，并用MTT法筛选出APN作用于该细胞的适宜浓度及在高糖环境诱导细胞凋亡时APN改善滋养细胞凋亡的最佳浓度。分别在该浓度下给予CompoundC(AMPK抑制剂)、LY294002(PI3K抑制剂)及MK-2206HCL(Akt抑制剂)，通过Westernblot方法检测造模小鼠绒毛滋养层细胞中p-AMPK、p-PI3K、p-Akt、FoxO3a、p-FoxO3a及Caspase-3蛋白相对表达量。<br>　　结果：<br>　　1.APN可以提高PCOS模型小鼠的受孕率及降低胚胎吸收率(P＜0.001)。qPCR结果显示，与正常对照组相比，PCOS造模组小鼠的子宫组织中AMPK、PI3K及Akt的mRNA相对表达量均下降(P＜0.001)，而APN组中上述mRNA的相对表达量均升高(P＜0.001)；APN组中AMPK、PI3K及Akt的mRNA相对表达水平较PCOS组显著增加(P＜0.001)；且三组小鼠子宫组织中AMPK、PI3K及Akt的mRNA相对表达水平变化趋势相同。<br>　　2.小鼠子宫组织Westernblot结果显示，PCOS小鼠子宫组织中p-AMPK、p-PI3K及p-Akt蛋白表达水平明显低于正常对照组(P＜0.05)；而APN组小鼠子宫组织中上述蛋白的相对表达水平较PCOS组及对照组显著增高(P＜0.05)。<br>　　3.高糖环境诱导滋养细胞凋亡时，48h后用Westernblot法检测p-PI3K、p-AMPKα、p-Akt、FoxO3a、p-FoxO3a及Caspase-3蛋白相对表达量。当给予AMPK抑制剂时，p-PI3K、p-Akt及p-FoxO3a蛋白的相对表达量下降，Caspase-3蛋白的相对表达量增加;给予PI3K抑制剂时，p-AMPKα、p-Akt及p-FoxO3a蛋白的相对表达量降低，Caspase-3蛋白的相对表达量增加;而给予Akt抑制剂时，p-Akt、p-FoxO3a蛋白的相对表达量降低，Caspase-3蛋白的相对表达量增加。<br>　　结论：<br>　　孕早期对PCOS模型孕鼠皮下注射APN可以改善流产率及胚胎吸收率，该作用可能与调控AMPK/PI3K/Akt通路相关。且APN可以显著减少体外培养的PCOS模型小鼠滋养细胞凋亡，其潜在的分子机制可能与AMPK/PI3K/Akt/FoxO3a信号通路有关。