摘要背景:胃癌是最常见的消化道肿瘤之一,在全球范围内胃癌的发病率及死亡率较高。胃癌的早期检出率不高、筛查机制不成熟,导致胃癌治愈率低、预后较差。故进一步发掘胃癌的免疫学标志物,对于胃癌的诊治及发生发展机制研究有重要的意义。重组cDNA表达克隆血清学筛选鉴定技术(serological identification of antigens by recombinant cDNA expression cloning,SEREX)是筛选和鉴定肿瘤相关性抗原基因的高效研究方法,可以特异性识别及分离出与肿瘤具有相关性的血清抗原标志物。本研究的内容主要有以下几点:1.利用重组表达cDNA克隆血清学分析技术(SEREX)筛选胃癌患者阳性单克隆。2.对筛选出来的阳性单克隆进行初步的分析。目的在于为后续探索胃癌的发病机制及防治方案、免疫治疗等提供初步的理论及实验研究基础。<br> 目的:应用SEREX技术筛选及鉴别胃癌睾丸重组cDNA表达克隆相关抗原。<br> 方法:1.利用胃癌确诊患者血清,对人睾丸细胞cDNA表达文库进行免疫学筛选,获得阳性克隆。2.利用单克隆内切除技术提取出pBluescript质粒,获取阳性单克隆。对提取出的cDNA目的基因质粒进行DNA测序,得出其序列信息。3.利用NCBI-BLAST检索工具对阳性单克隆基因进行同源性检索及对其基因功能进行初步解析,得出胃癌相关的人睾丸细胞cDNA表达文库阳性克隆抗原,对抗原功能及与胃癌发生发展关系进行分析。<br> 结果:1.通过3轮SEREX技术筛选cDNA文库,获得18个重组cDNA阳性克隆。2、利用单克隆内切除技术,成功得出12个含有目的基因的pBluescript质粒,并成功对其基因测序。3.根据NCBI-BLAST检索工具对阳性单克隆进行同源性检测及初步基因功能分析,得出ALDOA、CTGF、MACF1、MMP9、BRAT1、MAGEA2、MAGEA3、PHD10、SSX4、CAGE110个重组cDNA阳性克隆(肿瘤重组cDNA表达克隆相关抗原)。<br> 结论:SEREX技术能够成功筛选出及识别出胃癌睾丸组织重组cDNA表达克隆相关抗原,可作为进一步研究胃癌血清抗体标志物研究提供相应的免疫学基础,为胃癌产生机制提供了初步的研究方向。
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