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摘要D-乳酸作为一种重要的聚乳酸合成原料和手性中间前体物，在农业、化工等各个领域均有广泛应用。目前新兴的研究趋势是开发廉价木质纤维素原料，然而存在的问题是木质纤维素水解液中的混合碳源在大肠杆菌利用过程中会对其他碳源产生分解代谢产物阻遏效应。为了减轻该阻遏效应，本文将通过基因重组手段敲除EcoliJH15(△ptsG)的葡萄糖转运酶相关基因mglB和galP，构建两株能利用混合碳源(五碳糖和六碳糖)大肠杆菌工程菌来发酵生产D-乳酸，研究内容及结果如下：<br>　　(1)E.coliJH13是敲除了丙酮酸甲酸裂解酶(focA-pflB)、乙酸激酶(ackA)、乙醇脱氢酶(adhE)、延胡索酸还原酶(frdABCD)、部分核酸酶(rng HSR2)基因的能高效利用木糖生产D-乳酸的基因工程菌，由JH13来构建能同步利用混合糖发酵产D-乳酸的工程菌E.coliJH15(△ptsG),再以JH15为出发菌株，通过同源重组技术敲除了甲基半乳糖苷结合蛋白基因(mglB)，构建了E.coliJH18，在E.coliJH18基础上又继续敲除半乳糖转运蛋白基因(galP)，构建了E.coliJH20。<br>　　(2)mglB基因和galP基因的敲除确实能降低葡萄糖入胞速度。以10%葡萄糖作为糖源进行发酵时，JH18葡萄糖消耗速率为2.56g/L，相比JH15和JH13分别降低了22.2%和26.9%，JH20葡萄糖消耗速度为2.37g/L，相比JH15和JH13分别降低了28%和34.9%。<br>　　(3)mglB和galP基因的敲除对木糖消耗速率产生较大影响。以10%木糖作为糖源进行发酵时，JH18木糖消耗速度为1.58g/L，相较于JH15和JH13快了一倍，JH20木糖消耗速度为1.2g/L，比JH15、JH13提高了51.9%<br>　　(4)mglB和galP基因的敲除能在JH15基础上进一步降低葡萄糖效应，使混合碳源中木糖利用速度增加。以5%葡萄糖和5%木糖作为糖源进行发酵时，JH18葡萄糖消耗速度为1.1g/L，比JH15和JH13分别降低了19.7%和53.4%，木糖消耗速度为0.83g/L，比JH15和JH13分别提高了69.8%和160.7%；JH20葡萄糖消耗速度为0.85g/L，比JH15和JH13分别降低了38%和63.7%，木糖消耗速度为0.48g/L，比JH15和JH13分别增加了72.1%和164.3%。<br>　　(5)在低糖环境下mglB基因比ptsG基因对于降低葡萄糖入胞速率的程度更大。在1%葡萄糖和1%木糖环境中，JH18耗费12h发酵结束，葡萄糖糖耗速度为0.86g/L，木糖消耗速度为0.79g/L；JH15耗费24h发酵结束，葡萄糖糖耗速度为1.62g/L，木糖消耗速度为0.58g/L。