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摘要【目的】借助动态培养系统构建骨髓间充质干细胞(Bone marrow-mesenchymal stem cell, BM-MSC)三维复层细胞片，并在大鼠心肌梗死(Myocardial infarction, MI)模型中研究其治疗效果与相关机制。<br>　　【方法】使用磷脂酶A2脱细胞方法制备脱细胞猪心包膜(Decellularized porcine pericardium, DPP)，借助天冬氨酸(Aspartic acid, Asp)在DPP上交联VEGF。使用RAD16-I水凝胶搭建BM-MSC三维复层结构，分别在动态培养系统及传统静态培养条件获得动态培养细胞片(Dynamic culture cell sheet, DCcs)及静态培养细胞片(Static culture cell sheet, SCcs)，检测细胞的三维结构、增殖、凋亡及生长因子水平。在大鼠MI模型中，评价DCcs与SCcs4周内对大鼠梗死心肌的疗效，追踪BM-MSC体内存活情况。<br>　　【结果】DPP中异种细胞成分被高效去除，天然胶原被完整保留。借助Asp在DPP上以共价交联方式构建DPP-Asp-VEGF支架，VEGF7天内稳定释放。在细胞片体外培养48h后，与SCcs相比，DCcs中细胞密度更高，细胞均匀分布，且BM-MSC维持了较好的增殖、生长因子分泌及干细胞标记物表达水平，细胞凋亡率显著减少。体内结果显示，与MI对照组相比，DCcs显著减少梗死心肌面积、改善心功能，促进血管新生；与SCcs相比，DCcs组显著提高BM-MSC体内4周存活率。<br>　　【结论】使用三维动态培养系统构建得到的DCcs可维持良好的干细胞生物学活性，在大鼠MI模型中DCcs有效减少梗死心肌面积、改善心功能并促进梗死区血管新生。