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摘要目的：<br>　　生物钟系统调节的机体昼夜节律可能引起药物代谢节律性差异，从而导致药物药效和毒副作用产生变化。人体内代谢酶CYP2A6(小鼠Cyp2a5)在许多药物体内代谢和解毒中发挥着重要作用。有研究表明，Ppar-γ在糖代谢和脂代谢方面都具有重要的影响，且Ppar-γ的表达具有昼夜差异。然而其昼夜变化对代谢酶的影响仍未清楚。因此，本文主要评价肝脏内Cyp2a5的节律变化及其对香豆素(Cyp2a5底物)代谢的影响，并进一步探究核受体Ppar-γ对Cyp2a5节律变化的调节机制。<br>　　方法：<br>　　(1)将雄性C57BL/6小鼠置于12小时光照/12小时黑暗的环境下饲养，10天后分别在ZT2，ZT6，ZT10，ZT14，ZT18和ZT22六个昼夜时点处死小鼠，取肝脏，采用qPCR和Westernblotting检测Cyp2a5mRNA和蛋白表达量，评价Cyp2a5代谢酶和核受体Ppar-γ的肝脏表达节律性。<br>　　(2)采用体外酶孵育反应和小鼠体内药物代谢动力学实验评价Cyp2a5节律变化引起的香豆素代谢差异。<br>　　(3)采用Hepa1c1c7细胞，细胞水平探究核受体Ppar-γ激动剂Rosiglitazone、Ppar-γ高表达和Ppar-γ敲低对Cyp2a5表达的影响。采用高浓度血清刺激法，构建细胞节律模型，确定核受体Ppar-γ对Cyp2a5节律的调节作用。<br>　　(4)采用双荧光素酶报告基因、凝胶迁移实验和染色质免疫共沉淀等分子生物学手段，深入探讨Ppar-γ对Cyp2a5转录表达的调控作用机制。<br>　　结果：<br>　　(1)Cyp2a5和Ppar-γ在mRNA和蛋白水平表达均具有显著的昼夜节律性变化，Cyp2a5的mRNA的最高水平出现在ZT10，而蛋白的表达量最高点出现在ZT22和ZT2之间，提示Cyp2a5的蛋白表达与其mRNA在时间上存在较大延迟。另外，Ppar-γ蛋白的最高表达时间比mRNA延迟约4小时。此外，Ppar-γ蛋白与Cyp2a5两者mRNA间的线性相关系数达到0.989。<br>　　(2)体外酶孵育实验显示，Cyp2a5酶在ZT2时的代谢活性比ZT14时的代谢活性高；体内药代动力学实验结果显示，香豆素在ZT2时生成7-羟基香豆素在血浆中的浓度明显高于ZT14，证明Cyp2a5酶在ZT2时的代谢能力比ZT14强。<br>　　(3)核受体Ppar-γ激动剂Rosiglitazone处理Hepa1c1c7细胞后，Cyp2a5的mRNA水平和蛋白水平显著提高。细胞转染高表达Ppar-γ后，Cyp2a5的mRNA水平明显提高，但蛋白水平无显著性变化；敲低Ppar-γ后，Cyp2a5的mRNA和蛋白的表达量均显著降低。在血清诱导细胞产生节律后，Ppar-γ和Cyp2a5在mRNA水平和蛋白水平都呈现出显著节律性；在此基础上敲低Ppar-γ后，Ppar-γ和Cyp2a5在mRNA水平上的节律性均显著减弱。结果表明，Ppar-γ正向调节Cyp2a5的节律性转录表达。<br>　　(4)双荧光素酶报告基因结果显示，Ppar-γ核受体激动剂Rosiglitazone能够增强Cyp2a5启动子的活性。Ppar-γ蛋白通过作用于Cyp2a5启动子上-1.5kb到-0.8kb之间的序列激活启动子。进一步的凝胶迁移实验和染色质免疫共沉淀实验表明，Ppar-γ蛋白与Cyp2a5启动子的结合位点为-1418bp到-1396bp。<br>　　结论：<br>　　(1)Cyp2a5酶和Ppar-γ核受体在mRNA和蛋白水平都表现节律性变化；<br>　　(2)Cyp2a5的节律变化影响香豆素的代谢变化；<br>　　(3)Ppar-γ正向调节Cyp2a5的节律变化；<br>　　(4)Ppar-γ调控Cyp2a5是通过结合到Cyp2a5启动子上-1418bp~-1396bp序列，从而激活Cyp2a5的转录。