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摘要目的：<br>　　探讨CDK5磷酸化CRMP2对AMPA受体GluA1亚基转运的影响。<br>　　方法：<br>　　构建CRMP2的CDK5磷酸化位点S522磷酸化突变的真核及原核表达载体，先通过GST-pulldown、Co-IP和海马神经元共定位实验明确CRMP2与GluA1在体内外的相互作用关系，以及该作用与CRMP2磷酸化水平的关系。然后在稳定表达GluA1的HEK293T细胞株和海马神经元中过表达CRMP2磷酸化突变体，通过细胞膜蛋白提取和免疫细胞化学观察细胞膜上SurfaceGluA1和总细胞TotalGluA1的表达情况，并用全细胞膜片钳技术记录AMPA受体介导的mEPSC。最后，使用CDK5的特异性抑制剂purvalanolA处理海马神经元，分析CDK5是否通过磷酸化CRMP2介导树突棘的可塑性，以及CRMP2所发挥的作用。<br>　　结果：<br>　　1)在海马神经元中通过全细胞膜片钳检测AMPA受体介导的mEPSC，过表达CRMP2后频率和幅度增加(P＜0.05)，干扰CRMP2后频率和幅度减低(P＜0.05)。<br>　　2)在稳定表达GluA1的HEK293T细胞株中，通过膜蛋白提取和免疫细胞化学发现过表达CRMP2后细胞膜上GluA1Surface的表达增加(P＜0.05)，总细胞的GluA1Total的表达无明显差异(P＞0.05)。<br>　　3)通过GST-pulldown、Co-IP和海马神经元共定位实验发现CRMP2与GluA1在体内和体外均存在直接相互作用，以及该作用与CRMP2磷酸化水平有关。与WT组相比，磷酸化CRMP2(S522D)与GluA1结合减弱(P＜0.05)，非磷酸化CRMP2(S522A)与GluA1结合增强(P＞0.05)。<br>　　4)在GluA1稳定表达的细胞株中通过膜蛋白提取和免疫荧光实验发现，与WT组相比，过表达CRMP2(S522A)后细胞膜上GluA1Surface的表达增加(P＜0.05)，过表达CRMP2(S522D)后细胞膜上GluA1Surface的表达减少(P＜0.05)，而各组总细胞的GluA1Total的表达无明显差异(P＞0.05)。在海马神经元中，通过活细胞染色检测细胞膜上GluA1的荧光强度，与WT组相比，过表达CRMP2(S522A)后细胞膜上GluA1的荧光强度增加(P＜0.05)，过表达CRMP2(S522D)后细胞膜上GluA1的荧光强度减弱(P＜0.05)；通过全细胞膜片钳检测AMPA受体介导的mEPSC，与WT组相比，过表达CRMP2(S522A)后频率和幅度增加(P＜0.05)，过表达CRMP2(S522D)后频率和幅度减低(P＜0.05)。<br>　　5)在海马神经元中，转染CRMP2磷酸化突变体质粒和干扰CRMP2后，用CDK5的特异性抑制剂purvalanolA处理神经元，通过电生理检测AMPA受体介导的mEPSC，purvalanolA处理检测到过表达CRMP2及其突变体后mEPSC幅度和频率均增加(P＜0.05)，而干扰CRMP2的mEPSC的幅度和频率无明显影响(P＞0.05)。<br>　　结论:<br>　　1)CRMP2与GluA1存在相互作用，该作用与CRMP2的磷酸化水平有关。<br>　　2)CRMP2及非磷酸化CRMP2(S522A)可促进细胞膜上GluA1的表达，而磷酸化CRMP2(S522D)则反之。<br>　　3)CDK5通过磷酸化CRMP2抑制AMPA受体GluA1亚基的转运。