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摘要目的：<br>　　1.通过基因重组技术构建人源过氧化氢酶重组质粒，转染感受态大肠杆菌BL21(E.coli BL21)进行诱导表达，获得可溶性的重组人源过氧化氢酶(recombinant human CAT)。<br>　　2.在软骨细胞(C28/I2)体外培养中加入提纯后的rhCAT，探究其对软骨细胞活性、细胞内过氧化氢的生成和细胞炎症凋亡调控因子的表达的影响。<br>　　方法:<br>　　1.获取rhCAT片段与pGEX-4T3载体链接构建和质粒，转染E.coliBL21，通过调整诱导条件获得理想的蛋白产量，通过亲和树脂结合后离心获得纯化rhCAT。<br>　　2.在体外C28/I2细胞培养中加入不同浓度的rhCAT共同培养，MTS法检测细胞活性。以TNF-α为诱导剂构建C28/I2细胞炎症凋亡模型，加入rhCAT，检测模型内过氧化氢生成量、凋亡调节因子FADD(Fasassociated dead domain protein)、MMP-13(Matrix metaloproteinases-13)的表达量，验证rhCAT的保护功效。<br>　　结果：<br>　　1.重组rhCAT质粒转化大肠杆菌BL21后可准确的表达，最优诱导条件为：IPTG0.2mM，诱导温度30℃，诱导时间16h，最终提纯后rhCAT活性为43305.85±1453.93U/mg。<br>　　2.在C28/I2软骨细胞体外培养中加入不同浓度的rhCAT，从400U/ml浓度开始可提高软骨细胞活性(P＜0.05)。rhCAT对TNF-α诱导的C28/I2软骨细胞炎症凋亡模型的干预实验中显示，与空白对照组相比，在模型中加入不同浓度的rhCAT可减少细胞内的过氧化氢生成(p＜0.01)；同时加入rhCAT后FADD、MMP-13这2种凋亡相关基因的表达被下调(p＜0.01)。<br>　　结论：<br>　　我们成功构建了一套快速、高效、稳定的rhCAT体外表达体系。并通过体外细胞实验证实了rhCAT对体外培养细胞的活性提高和抗凋亡作用，为后续以rhCAT为基础的药物治疗方案的开发提供了初步资料。