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摘要具有共价闭合的环状RNA(circRNA)是一类新型的长非编码RNA，已经在植物，动物和人类在内的数千种生物中广泛发现。利用高通量RNA测序(RNA-seq)技术，发现许多内源性，稳定且在哺乳动物细胞中广泛表达的circRNA通常表现出细胞类型特异性，组织特异性或发育阶段特异性表达。越来越多的证据表明，某些circRNA可能调节microRNA(miRNA)作为microRNA海绵的功能，并在转录控制中起重要作用。circRNA与相关的miRNA相关，而circRNA-miRNA参与了严重的疾病途径，如细胞凋亡、血管生成、侵袭和转移。<br>　　本课题通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术验证circ_05381在大鼠肝细胞BRL-3A/RH-35/CBRH-7919/HSC-T6细胞中的表情情况以及在肝再生七个时间点的表达变化；为进一步研究在大鼠肝再生中发挥关键作用的circ_05381作深入的机理研究；首先通过慢病毒包装后侵染BRL-3A细胞、筛选得到过表达circ_05381细胞株，然后通过MTT、流式细胞数、qRT-PCR和Wersternblot等方法检测过表达circ_05381对BRL-3A细胞活力、表达、周期和增殖的影响，结果表明，过表达circ_05381后，与对照相比，BRL-3A细胞的活力增强，在细胞周期中，自接种后48、72h，G1期细胞比例降低，S期和G2/M期细胞比例明显增加，周期蛋白MYC和JUN等的表达量也明显升高，说明circ_05381过表达促进了细胞周期进程。综上所述，circ_05381过表达可以促进BRL-3A细胞的增殖。<br>　　鉴于circRNA已被证明可作为miRNA海绵，通过miRanda预测circ_05381相关的潜在miRNA发现这些miRNA含有circ_05381区域的至少一个结合位点(共10个)：miR-1247-5p、miR-138-5p、miR-181b-1-3p、miR-210-5p、miR-326-3p、miR-330-5p、miR-3559-3p、miR-370-3p、miR-382-5p和miR-505-5p。由于circ_05381和miRNA之间可能存在海绵功能，根据两者的时间点的表达情况，我们初步确定了4个miRNA(miR-138-5p、miR-370-3p、miR-382-5p和miR-505-5p)作进一步的研究。然后在BRL-3A细胞中观察上述四种miRNA(miR-138-5p、miR-370-3p、miR-382-5p和miR-505-5p)的表达，以及MTT，流式细胞术检测转染上述四种miRNA(miR-138-5p、miR-370-3p、miR-382-5p和miR-505-5p)后BRL-3A细胞的活力和周期情况，发现miR-138-5存在抑制细胞活力和周期，也就是抑制细胞增殖，而miR-370-3p则无明显抑制作用。<br>　　为了进一步探究circ_05381与miR-138-5p和miR-370-3p的靶向作用，本实验用双荧光素酶报告基因检测的方法来确定miR-138-5p和miR-370-3p与circ_05381-WT均存在结合作用，表明circ_05381是miR-138-5p和miR-370-3p的海绵。接着，本课题通过MTT和流式细胞术检测miR-138-5p和miR-370-3p的作用功能，发现miR-138-5p在细胞活力和细胞周期中都表现出与相反的细胞功能，抑制BRL-3A细胞活力和细胞增殖。而miR-370-3p则呈现的作用功能与circ_05381相一致。因此本实验挑选miR-138-5p做接下来的研究。我们通过TargetScan预测和文献查询确定了miR-138-5p的靶向mRNA(Foxc1, Egfr, Atpllc1)，并通过qRT-PCR发现Foxc1可能是miR-138-5p的潜在靶向mRNA。